[发明专利]一种用于检测酪氨酸酶的三明治结构的SERS传感器及其制备和检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测酪氨酸酶的三明治结构的SERS传感器及其制备和检测方法，该SERS传感器利用酪氨酸酶抗原抗体的特异性识别的原理，通过磁性基底的吸附和表面增强拉曼探针的增强作用，基底上的固相抗体与标记抗体通过与抗原的结合形成“固相抗体—待测抗原—标记抗体”三明治结构，通过对标记分子SERS信号的识别进行分析酪氨酸酶的含量，据此建立了检测酪氨酸酶的表面增强拉曼分析方法。本发明所述的检测方法具有快速、灵敏，简便、样品消耗少等优点。此外，利用此传感器检测酪氨酸酶具有良好的的线性，检测限较低，可达1ng/mL。同时，实际人血清样品中酪氨酸酶的加标回收率在96.0%‑136.0%范围内。因此，本发明有望成为临床检测酪氨酸酶的一种有效方法。

主权项

1.一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于，由下述方法制得：(1)Au^4MB@Au胶体的制备取10mL纳米金溶胶，加入5‑15μL浓度为0.1mol/L的4巯基苯甲腈的乙醇溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，洗去未吸附在纳米金溶胶上的4巯基苯甲腈的溶液，离心后的沉淀重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@4MB胶体；往10mL的制备好的Au@4MB胶体中加入100‑250μL浓度为6*10^‑2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，离心后的沉淀重新分散于5ml超纯水中，得到Au^4MB@Au胶体,浓度约为0.2nmol/L(2)SERS探针的制备取1mL步骤(1)中制备好的Au^4MB@Au胶体，加入5‑40μL浓度为10^‑4mol/L的巯基‑聚乙二醇‑羧基溶液，搅拌后离心洗涤重新分散于1mLPBS缓冲溶液中，再加入50μL的浓度为10mg/mL1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和50μL浓度为10mg/mL的N‑羟基琥珀酰亚胺溶液用来活化胶体表面的羧基，搅拌30min后离心洗涤去除多余的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，重分散于1mL PBS缓冲溶液中，得到Au^4MB@Au‑HS‑PEG‑COOH胶体；将20‑70μL浓度为1.2*10^‑2mg/mL的酪氨酸酶抗体加入至1mLAu^4MB@Au‑HS‑PEG‑COOH胶体中，25℃偶联2h后加入5μL质量分数为5％的牛血清蛋白溶液，25℃反应1h从而封闭Au^4MB@Au‑HS‑PEG‑COOH胶体表面未反应的羧基基团，制得SERS探针；(3)磁性基底的制备取500μL浓度为0.5mg/mL的羧基化的磁珠加入50μL的浓度为10mg/mL的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和50μL浓度为10mg/mL的N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，旋涡混匀使磁珠充分悬浮，25℃活化30分钟，磁性分离洗涤，去除上清液；接着加入20‑70μL的酪氨酸酶的抗体，25℃偶联1.5‑3h后加入5μL质量浓度为5％的牛血清蛋白溶液，25℃反应1h封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团，离心管置于磁性分离器上分离去除上清液，得磁性基底；(4)SERS传感器的制备取1mL制备好的SERS探针和500μL制备好的磁性基底放置于5毫升离心管中超声5min混合，即得SERS传感器。