[发明专利]一种用于检测酪氨酸酶的三明治结构的SERS传感器及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于，由下述方法制得：

(1)Au^4MB@Au胶体的制备

取10mL纳米金溶胶，加入5-15μL浓度为0.1mol/L的4-巯基苯甲腈的乙醇溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，洗去未吸附在纳米金溶胶上的4-巯基苯甲腈的溶液，离心后的沉淀重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@4MB胶体；往10mL的制备好的Au@4MB胶体中加入100-250μL浓度为6*10^-2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，离心后的沉淀重新分散于5ml超纯水中，得到Au^4MB@Au胶体，浓度为0.2nmol/L；

(2)SERS探针的制备

取1mL步骤(1)中制备好的Au^4MB@Au胶体，加入5-40μL浓度为10^-4mol/L的巯基-聚乙二醇-羧基溶液，搅拌后离心洗涤重新分散于1mLPBS缓冲溶液中，再加入50μL的浓度为10mg/mL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和50μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液用来活化胶体表面的羧基，搅拌30min后离心洗涤去除多余的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液，重分散于1mL PBS缓冲溶液中，得到Au^4MB@Au-HS-PEG-COOH胶体；将20-70μL浓度为1.2*10^-2mg/mL的酪氨酸酶抗体加入至1mLAu^4MB@Au-HS-PEG-COOH胶体中，25℃偶联2h后加入5μL质量分数为5％的牛血清蛋白溶液，25℃反应1h从而封闭Au^4MB@Au-HS-PEG-COOH胶体表面未反应的羧基基团，制得SERS探针；

(3)磁性基底的制备

取500μL浓度为0.5mg/mL的羧基化的磁珠加入50μL的浓度为10mg/mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺溶液和50μL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液，旋涡混匀使磁珠充分悬浮，25℃活化30分钟，磁性分离洗涤，去除上清液；接着加入20-70μL的酪氨酸酶的抗体，25℃偶联1.5-3h后加入5μL质量浓度为5％的牛血清蛋白溶液，25℃反应1h封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团，离心管置于磁性分离器上分离去除上清液，得磁性基底；

(4)SERS传感器的制备

取1mL制备好的SERS探针和500μL制备好的磁性基底放置于5毫升离心管中超声5min混合，即得SERS传感器。

2.根据权利要求1所述一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于，所述纳米金溶胶由以下方法制得：取100mL质量分数为0.01％的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1-2mL质量分数为1％柠檬酸钠溶液，加入沸腾的氯金酸溶液中，待沸腾10-20min反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶。

3.根据权利要求1所述一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于：所述HS-PEG-COOH的分子量为2000。

4.根据权利要求1所述一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于：所述磁珠的粒径为1微米。

5.根据权利要求2所述一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于：所述纳米金溶胶的粒径为25-40nm,紫外吸收波长为520nm。

6.根据权利要求1所述一种酪氨酸酶灵敏检测的三明治结构SERS传感器的制备方法，其特征在于：所述Au^4MB@Au核壳结构的粒径为35-50nm，紫外吸收波长为530nm。