[发明专利]一种吴李碘泡虫壳瓣的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种吴李碘泡虫壳瓣的分离纯化方法，包括组织样品匀浆、孢子纯化、超声破碎、Percoll离心沉降、壳瓣回收、二次纯化、回收液重悬清洗。该方法主要利用壳瓣和其他杂质质量比重的不同实现了壳瓣和杂质的分离，采用100%的Percoll分离液对孢子破碎液进行离心，在Percoll分离液中部可获得纯度接近100%的完整壳瓣。本发明弥补了目前对壳瓣获取实验方法的空白，对了解粘体动物生物学特性、阐明粘体动物抗药机制以及开发粘孢子虫病害防控手段具有重要意义。

主权项

1.一种吴李碘泡虫壳瓣的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A、组织样品匀浆：将镜检发现含有吴李碘泡虫孢囊的鲫肝脏剪下，放入匀浆器中，加入0.1M PBS缓冲液充分研磨，直至匀浆器中无明显组织块；B、孢子纯化：用双层医用纱布过滤匀浆，收集滤液；用0.1M PBS缓冲液离心清洗2‑3次，重悬于PBS缓冲液；通过蔗糖密度梯度离心分离出孢子，PBS缓冲液清洗后重悬；C、超声破碎：将孢子悬液置于冰上，超声波破碎仪破碎，获得孢子破碎液；D、Percoll离心沉降：依次在离心管中加入100％Percoll分离液和孢子破碎液，以7000‑9000rpm转速，离心14‑16min，待破碎孢子达到沉降平衡后静置；E、壳瓣回收：吸取分离液中部的白色漂浮物；F、二次纯化：重复步骤D、E，将吸出的液体转移至离心管中；G、回收液重悬清洗：加入0.1M PBS缓冲液离心清洗2‑3次，获得高纯度吴李碘泡虫壳瓣，用0.1M PBS缓冲液重悬壳瓣，调节至所需浓度。