[发明专利]一种吴李碘泡虫壳瓣的分离纯化方法

权利要求书

1.一种吴李碘泡虫壳瓣的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、组织样品匀浆：将镜检发现含有吴李碘泡虫孢囊的鲫肝脏剪下，放入匀浆器中，加入0.1M PBS缓冲液充分研磨，直至匀浆器中无明显组织块；

B、孢子纯化：用双层医用纱布过滤匀浆，收集滤液；用0.1M PBS缓冲液离心清洗2-3次，重悬于PBS缓冲液；将孢子悬液、质量百分比分别为30％、40％、50％、60％的蔗糖溶液依次加入离心管底部，制成密度梯度离心液，通过蔗糖密度梯度离心分离出孢子，离心转速3500rpm，离心15min，分离得到的孢子用PBS缓冲液清洗后重悬；

C、超声破碎：将孢子悬液置于冰上，超声波破碎仪破碎，获得孢子破碎液；

D、Percoll离心沉降：依次在离心管中加入100% Percoll分离液和孢子破碎液，以7000-9000rpm转速，离心14-16min，待破碎孢子达到沉降平衡后静置；

E、壳瓣回收：吸取分离液中部的白色漂浮物；

F、二次纯化：重复步骤D、E，将吸出的液体转移至离心管中；

G、回收液重悬清洗：加入0.1M PBS缓冲液离心清洗2-3次，获得高纯度吴李碘泡虫壳瓣，用0.1M PBS缓冲液重悬壳瓣，调节至所需浓度。