[发明专利]一种大规模引物冷凝电泳纯化分离的方法

摘要

本发明公开一种大规模引物冷凝电泳纯化分离的方法，涉及生物工程纯化技术领域。该方法包括16％预制胶配制、10xTBE缓冲液配制、PAGE胶配制、加样跑样四个步骤，上样前加饱和尿素溶解引物，一方面可以使样品变性，另一方面可以增加样品比重，使得样品加入凹槽时使引物下沉，与分离方法配套的凝胶电泳槽包括低温恒温箱、电泳槽主体，电泳槽主体放置于低温恒温箱的内部，低温恒温箱内设有冷凝器、第二温度传感器并盛装有乙醇，通过冷却乙醇的循环冷却，能够保持电泳缓冲液的低温恒温，不会造成由于温度升高而使条带变形的情况，大大节约了需要更换缓冲液的控温成本。

主权项

1.一种大规模引物冷凝电泳纯化分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)16％预制胶配制：将4200g尿素、1520g丙烯酰胺、80g甲叉双丙烯酰胺、1L 10xTBE缓冲液混合后，使用超纯水定容至10L；2)10xTBE缓冲液配制：将108g三羟甲基氨基甲烷、55g硼酸、7.44g乙二胺四乙酸二钠，加入超纯水用磁力搅拌器搅拌溶解，最后用超纯水定容至1L；3)PAGE胶配制：先将胶板(26)用夹子和橡皮条夹好，用量筒量取500mL/400mL的16％预制胶，倒入500mL蓝盖瓶，然后迅速加入1.5mL/1.2mL的10％过硫酸铵溶液和0.5mL/0.4mL的四甲基乙二胺，充分震荡静止几秒，待气泡排出时倒入胶板，倒完后插上梳子等待胶凝固；当胶板上摸起来发热时则胶开始逐渐凝固形成凝胶层(27)；凝固之后缓慢将梳子用钢尺拔出来，再将梳子插入后产生的两个凹槽残胶给捣出来，并用水冲洗干净；将板子底部的条子抽走，胶板(26)擦干净后放入凝胶电泳槽，用夹子夹紧，在上面倒入1xTBE缓冲液淹没凹槽(28)上方；4)加样跑样：上样前把样品抽干后，加入适量饱和尿素溶解，用移液枪吸入后，缓慢打进凹槽(28)；有修饰的外面用袋子罩好避光，窗帘拉好；无修饰的要做标记；然后打开电源(23)、单向阀(5)、冷却器(6)、冷凝器(11)，乙醇循环箱(7)内的乙醇经过冷却器(6)、单向阀(5)、螺旋盘管(10)进入低温恒温箱内，在电压600V条件下样品跑样6‑8h即可。