[发明专利]一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法在审
| 申请号： | 201910213705.4 | 申请日： | 2019-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN109897885A | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 严琰 | 申请（专利权）人： | 嘉兴菲沙基因信息有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适用于细胞系和动物组织ATAC‑seq测序技术的文库构建方法，所述方法包括：1)收集细胞或动物组织，制备细胞悬液；2)加入含NP40的裂解液，裂解细胞膜，获得细胞核并纯化；3)收集细胞核进行定量和细胞核完整性检测；4)完整细胞核中加入Tn5转座酶进行转座反应并纯化；5)PCR扩增，构建二代文库并纯化；6)进行高通量测序，得到基因数据。该方法基于转座酶对DNA含量敏感的特征，直接通过DNA含量进行定量操作，适用性广，尤其适用于物种或组织稀少、保存状态较差组织进行文库构建。同时，本发明通过前期的优化使得回收到的细胞核可以用于国产vazyme公司开发的Tn5转座酶并得到了良好的实验结果，使得ATAC‑seq不再受转座酶种类的限制。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞核 动物组织 文库构建 测序技术 转座酶 细胞膜 制备细胞悬液 高通量测序 完整性检测 保存状态 基因数据 裂解液 构建 裂解 转座 文库 物种 细胞 回收 敏感 优化 开发 | ||
【主权项】：
1.一种适用于细胞系和动物组织ATAC‑seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)收集细胞或动物组织，制备细胞悬液；(2)加入含NP40的裂解液，裂解细胞膜，获得细胞核并纯化；(3)收集细胞核进行定量和细胞核完整性检测；(4)完整细胞核中加入Tn5转座酶进行转座反应并纯化；(5)PCR扩增，构建二代文库并纯化；(6)进行高通量测序，得到基因数据。
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