[发明专利]一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法

权利要求书

1.一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)收集细胞或动物组织，制备细胞悬液；

(2)加入含NP40的裂解液，裂解细胞膜，获得细胞核并纯化；

(3)收集细胞核进行定量和细胞核完整性检测；

(4)完整细胞核中加入Tn5转座酶进行转座反应并纯化；

(5)PCR扩增，构建二代文库并纯化；

(6)进行高通量测序，得到基因数据。

2.根据权利要求1所述的一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述细胞悬液制备方法为：对于细胞系，收集含有10⁵个细胞的细胞沉淀；对于组织样，取0.05g组织进行液氮研磨，将所述沉淀用预冷的RSB混合液重悬；所述RSB混合液包括10mM Tris-HCl、10mM NaCl、3mM MgCl₂。

3.根据权利要求1所述的一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中裂解液包括10mM Tris-HCl、10mM NaCl、3mM MgCl₂、0.5vol％NP40、0.1vol％Tween-20和1×protease inhibitor；所述步骤(2)中裂解进行以下处理：细胞悬液加入预冷的裂解液，轻弹混匀沉淀；置于4℃冰箱中的旋转混匀仪上，冰上孵育5min后4℃500g离心5min，去除上清液；加入1mL的RSB和20uL 5％Tween-20，上下颠倒混匀，500rcf 4℃离心5min，除上清得裂解后的细胞核沉淀。

4.根据权利要求1所述的一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中细胞核纯化方法为：重悬细胞核沉淀，采用Percoll密度梯度离心法，根据细胞核悬液不同物质的特性，使用不同密度梯度进行筛选，回收可用的细胞核。

5.根据权利要求1所述的一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中细胞核定量和细胞核完整性检测的方法为：取RSB重悬细胞核，吹打混匀后，分别取出50ul于两个离心管中，其中一管加入5ul的Proteinase K，另一管不加Proteinase K，56℃反应10分钟后检测DNA含量，并通过比较两个离心管中DNA含量来判断细胞核的完整性。

6.根据权利要求1或5任一所述的一种适用于细胞系和动物组织ATAC-seq测序技术的文库构建方法，其特征在于，步骤(4)中转座反应为：取500ng DNA对应的完整的核小体悬液，立即加Tn5转座酶及TD转座缓冲液进行转座反应，轻轻涡旋后短暂离心，37℃水浴反应30min；转座结束后用Qiagen MinElute Kit进行纯化，10ul洗脱液洗脱，纯化后的DNA于-20度保存。