[发明专利]一种山桐子高质量DNA提取方法

摘要

本发明属于DNA提取技术领域，公开了一种山桐子高质量DNA提取方法。本发明以CTAB法为框架，研磨时加入防氧化剂，裂解前，进行PEG洗脱，并优化后续CTAB法操作步骤，形成包括材料采集、材料研磨、PEG洗脱、CTAB裂解、萃取、DNA沉淀与收集等步骤的一种山桐子高质量DNA提取方法。本方法提取的山桐子DNA，浓度高，纯度高，DNA质量显著优于现有方法，浓度平均为438.93ng/ul，为试剂盒法的8.5倍，OD260/280比值在1.94‑1.97间，OD260/230比值在2.1‑2.17间，蛋白质污染，DNA糖类与盐污染均得到极好控制，DNA完整。实施例显示，本法提取的山桐子DNA可以满足SSR标记分型、简化基因组测序等分子试验所需；同时本方法不使用苯酚进行复萃取，在简化试验步骤，缩短试验时间的同时，也减少有机溶剂对人体健康的损害。

主权项

1.一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于，包括材料采集、材料研磨、PEG洗脱、CTAB裂解、萃取、DNA沉淀与收集，具体步骤如下：S1，材料采集：采集各样本山桐子嫩叶，然后装于冻存管立即存于液氮中，转移至‑80℃冰箱保存；S2，材料研磨：将嫩叶放入研钵中，加入液氮充分研磨，研磨样品时加入了1/10样本重量的防氧化剂，混合粉末加入2ml离心管中；S3，PEG洗脱：向装有样品粉末的2ml离心管中加入1‑1.2mlPEG洗脱液，翻转混匀，室温静止片刻，离心收集沉淀，重复洗涤多次；S4，CTAB裂解：向经PEG漂洗液的材料中加入1ml裂解液，65℃裂解后，离心取上清；S5，萃取：向S4中所得上清液，加入同体积的氯仿:异戊醇(24:1)混合液，翻转混匀，静置5min，12000rpm离心10min，将上清转入一新的2ml的离心管中；反复该步骤2‑3次；S6，DNA沉淀与收集：上清液转入2ml离心管中，加等体积的预冷异丙醇与0.1体积的3M醋酸钠(pH5.2)，翻转； 置于‑20℃放置2hrs，4℃，12000rpm离心20min，弃上清液，加1ml 70%乙醇洗DNA沉淀，转入1.5ml离心管，12000rpm离心5min，倒掉上清，通风干燥约40min，保证DNA充分干燥；加100μl体积的ddH2O溶解DNA，完全溶解后，进行检测或‑20℃保存。