[发明专利]一种山桐子高质量DNA提取方法

权利要求书

1.一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于，包括材料采集、材料研磨、PEG洗脱、CTAB裂解、萃取、DNA沉淀与收集，具体步骤如下：

S1，材料采集：采集各样本山桐子嫩叶，然后装于冻存管立即存于液氮中，转移至-80℃冰箱保存；

S2，材料研磨：将嫩叶放入研钵中，加入液氮充分研磨，研磨样品时加入了1/10样本重量的防氧化剂，混合粉末加入2ml离心管中；

S3，PEG洗脱：向装有样品粉末的2ml离心管中加入1-1.2mlPEG洗脱液，翻转混匀，室温静止片刻，离心收集沉淀，重复洗涤多次；

S4，CTAB裂解：向经PEG漂洗液的材料中加入1ml裂解液，65℃裂解后，离心取上清；

S5，萃取：向S4中所得上清液，加入同体积的氯仿:异戊醇(24:1)混合液，翻转混匀，静置5min，12000rpm离心10min，将上清转入一新的2ml的离心管中；反复该步骤2-3次；

S6，DNA沉淀与收集：上清液转入2ml离心管中，加等体积的预冷异丙醇与0.1体积的3M醋酸钠(pH5.2)，翻转； 置于-20℃放置2hrs，4℃，12000rpm离心20min，弃上清液，加1ml70%乙醇洗DNA沉淀，转入1.5ml离心管，12000rpm离心5min，倒掉上清，通风干燥约40min，保证DNA充分干燥；加100μl体积的ddH2O溶解DNA，完全溶解后，进行检测或-20℃保存。

2.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S1中春季采集各样本山桐子嫩叶在春季，以早春为宜，约3月底-4月中旬。

3.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S2中防氧化剂聚乙烯吡咯烷酮PVP。

4.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S2中混合粉末加入2ml离心管中，加至2/5处为佳。

5.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S3中，PEG洗脱液的配置：4.5mmol/LEDTA，pH=8.0；45mmol/LTris-HCl ，pH=8.0，300mmol/L山梨醇，8.5%PEG8000，用前加入0.5%β-巯基乙醇。

6.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S3中，室温静止片刻，静止时间以1min为宜，离心收集沉淀，离心转速为2000rpm，离心时间为45s。

7.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S3中，重复洗涤多次，重复次数以3次为佳。

8.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S4中，65℃裂解时间为30min，裂解后，离心取上清，离心转速为6000rpm，离心时间为5min。

9.根据权利要求1所述的一种山桐子高质量DNA提取方法，其特征在于：S5中，萃取结束标准为：分离相中间层无杂质或杂质较少，上清液清澈。