[发明专利]一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法

摘要

本发明涉及一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，属于甘蔗组培研究技术领域。该方法以蔗株顶生幼叶为外植体，经启动培养和继代培养，获得胚性愈伤，并在光诱导条件下产生大量胚性细胞团。本发明提供的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，主要包括外植体的选择、接种、启动培养、继代培养和光诱导，可一次性大量获得具有极强分化再生能力的胚性细胞团，有效解决了以往甘蔗热带种材料胚性细胞团获取困难的问题，可为相关科研和生产提供一种简易、高效、可靠的胚性细胞团来源。

主权项

1.一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），外植体取材：选择8‑10月龄甘蔗热带种健康茁壮蔗株，取其顶端肥厚带以上叶鞘，剥除外层老叶，酒精消毒后剥取最内层3片幼叶作为外植体；步骤（2），外植体接种与启动培养：将步骤（1）所得外植体切为单层叶块，叶背向上接种于启动培养基，28℃黑暗培养2‑3周，得到愈伤组织；所述的启动培养基为MS+2,4‑D 3.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖 15.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8‑5.9；步骤（3），继代培养诱导胚性愈伤：将步骤（2）得到的愈伤组织切成小块后，接种于继代培养基，28℃黑暗培养2‑3周后可转化为胚性愈伤；所述的继代培养基为MS+2,4‑D 1.5mg/L+复酞核酸 0.5mg/L+蔗糖45.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8‑5.9；步骤（4），光诱导胚性细胞团产生：将步骤（3）所得胚性愈伤转移至光诱导培养基，28℃光照培养2‑3周后胚性愈伤表面产生大量胚性细胞团；所述的光诱导培养基为MS+2,4‑D 1.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8‑5.9。