[发明专利]一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法

说明书

本发明涉及一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，属于甘蔗组培研究技术领域。该方法以蔗株顶生幼叶为外植体，经启动培养和继代培养，获得胚性愈伤，并在光诱导条件下产生大量胚性细胞团。本发明提供的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，主要包括外植体的选择、接种、启动培养、继代培养和光诱导，可一次性大量获得具有极强分化再生能力的胚性细胞团，有效解决了以往甘蔗热带种材料胚性细胞团获取困难的问题，可为相关科研和生产提供一种简易、高效、可靠的胚性细胞团来源。

技术领域

本发明属于甘蔗组培研究技术领域，具体涉及一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法。

背景技术

甘蔗热带种（Saccharum officinarum）是现代栽培品种（Saccharum Hybrid）的原始亲本，具有较为原始和简单的基因组结构，科研上作为甘蔗遗传学研究的便利材料而具有重要科研价值；同时具有大茎、高糖分、低纤维的农艺特征，生产上作为果蔗品种而具有重要经济价值。胚性细胞团是植物离体培养中产生的、由大量胚性细胞组成的团块，具有极强的全能性和分化能力。在分子遗传学研究方面，胚性细胞团是最为理想的外源基因受体；在组培快繁等实际应用方面，胚性细胞团具有远超一般愈伤的增殖分化能力和遗传稳定性。建立一套轻简高效的热带种胚性细胞团诱导技术体系，不仅可为相关基础科研提供便利，还有利于提高果蔗组培繁种育苗效率，具有重要的现实价值。

目前，我国对甘蔗胚性细胞团诱导研究还仅限于少数栽培品种。经研究人员努力，新台糖16号、22号，以及桂糖21号、28号等甘蔗栽培品种先后成功诱导获得胚性细胞团，建立了较为成熟的栽培品种胚性细胞团诱导技术体系。出乎意料的是，长期研究过程中发现，按照现有体系进行甘蔗热带种胚性细胞团诱导，几乎完全无法实现。这表明，热带种与现代甘蔗品种间已经具有了极其显著的遗传分化，对于诱导体系产生了截然不同的反应。因此，有必要开发一套专门适用于热带种的胚性细胞团诱导技术体系。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，该方法包括外植体取材、外植体接种与启动培养、继代培养诱导胚性愈伤、光诱导胚性细胞团产生等步骤，实现了甘蔗热带种胚性细胞团的高效诱导。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，包括如下步骤：

步骤（1），外植体取材：

选择8-10月龄甘蔗热带种健康茁壮蔗株，取其顶端肥厚带以上叶鞘，剥除外层老叶，酒精消毒后剥取最内层3片幼叶作为外植体；

步骤（2），外植体接种与启动培养：

将步骤（1）所得外植体切为单层叶块，叶背向上接种于启动培养基，28℃黑暗培养2-3周，得到愈伤组织；

所述的启动培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖 15.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8-5.9；

步骤（3），继代培养诱导胚性愈伤：

将步骤（2）得到的愈伤组织切成小块后，接种于继代培养基，28℃黑暗培养2-3周后可转化为胚性愈伤；

所述的继代培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L+复酞核酸 0.5mg/L+蔗糖45.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8-5.9；

步骤（4），光诱导胚性细胞团产生：

将步骤（3）所得胚性愈伤转移至光诱导培养基，28℃光照培养2-3周后胚性愈伤表面产生大量胚性细胞团；

所述的光诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉 5.0g/L，pH为5.8-5.9。