[发明专利]一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法

权利要求书

1.一种甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），外植体取材：

选择8-10月龄甘蔗热带种健康茁壮蔗株，取其顶端肥厚带以上叶鞘，剥除外层老叶，酒精消毒后剥取最内层3片幼叶作为外植体；

步骤（2），外植体接种与启动培养：

将步骤（1）所得外植体切为单层叶块，叶背向上接种于启动培养基，28℃黑暗培养2-3周，得到愈伤组织；

所述的启动培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖 15.0g/L+琼脂粉5.0g/L，pH为5.8-5.9；

步骤（3），继代培养诱导胚性愈伤：

将步骤（2）得到的愈伤组织切成小块后，接种于继代培养基，28℃黑暗培养2-3周后可转化为胚性愈伤；

所述的继代培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L+复酞核酸 0.5mg/L+蔗糖45.0g/L+琼脂粉5.0g/L，pH为5.8-5.9；

步骤（4），光诱导胚性细胞团产生：

将步骤（3）所得胚性愈伤转移至光诱导培养基，28℃光照培养2-3周后胚性愈伤表面产生大量胚性细胞团；

所述的光诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+复酞核酸 1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂粉5.0g/L，pH为5.8-5.9；

步骤（4）中，光照培养条件为：使用红蓝色LED光源，波长分别为660nm、450nm，红蓝光比例为1:1-3:1，总光量子通量密度为300-800μmol/m²·s，日光照时长12-16h，黑暗时长8-12h。

2.根据权利要求1所述的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，步骤（1）中，选取8-10月龄蔗株顶端生长点以上10 cm区段内最内层3片幼叶作为外植体。

3.根据权利要求1所述的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，步骤（1）中，选取8-10月龄蔗株顶端生长点以上3-8cm区段内最内层3片幼叶作为外植体。

4.根据权利要求1所述的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，步骤（2）中，叶块宽为2-4mm，长为4-6mm。

5.根据权利要求1所述的甘蔗热带种胚性细胞团诱导方法，其特征在于，步骤（3）中，愈伤组织切成2-5mm见方的小块。