[发明专利]一种VDR基因条件性敲除的floxed小鼠模型构建方法在审
| 申请号： | 201910043975.5 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN110408653A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 倪丽;陈靖 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属生物技术领域，涉及一种VDR基因条件性敲除的floxed小鼠模型构建方法。该方法利用基因打靶及ES细胞重组技术，利用细菌人工染色体在VDR基因外显子3的两侧分别放入Frt‑neo‑Frt‑loxP、loxP序列，构建VDR‑floxed载体，通过电击导入ES细胞；利用抗药性基因筛选出阳性ES细胞克隆后，经PCR及其产物测序确定，将阳性ES细胞移植至代孕的母鼠体内，产生含ES细胞来源的嵌合体小鼠；雄性嵌合体小鼠与雌性野生型小鼠互交F1代小鼠，经PCR及其产物测序确认获得含有Neo基因的VDR‑floxed杂合子小鼠；再将其与Flp小鼠杂交，获得去除neo基因VDR‑floxed杂合子小鼠。经实验验证本发明构建的VDR‑floxed小鼠模型，能导致VDR基因外显子3区域的敲除，导致VDR表达的缺失。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠 敲除 小鼠模型构建 产物测序 条件性 杂合子 构建 细菌人工染色体 生物技术领域 外显子3区域 抗药性基因 嵌合体小鼠 雄性嵌合体 野生型小鼠 利用基因 实验验证 小鼠模型 重组技术 外显子 电击 放入 去除 克隆 体内 杂交 筛选 移植 | ||
【主权项】：
1.一种VDR基因条件性敲除的同源重组载体，其特征在于，利用细菌人工染色体在VDR基因外显子3的两侧分别放入Frt‑neo‑Frt‑loxP、loxP序列，构建VDR‑floxed载体。
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