[发明专利]一种VDR基因条件性敲除的floxed小鼠模型构建方法在审
| 申请号： | 201910043975.5 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN110408653A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 倪丽;陈靖 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小鼠 敲除 小鼠模型构建 产物测序 条件性 杂合子 构建 细菌人工染色体 生物技术领域 外显子3区域 抗药性基因 嵌合体小鼠 雄性嵌合体 野生型小鼠 利用基因 实验验证 小鼠模型 重组技术 外显子 电击 放入 去除 克隆 体内 杂交 筛选 移植 | ||
1.一种VDR基因条件性敲除的同源重组载体，其特征在于，利用细菌人工染色体在VDR基因外显子3的两侧分别放入Frt-neo-Frt-loxP、loxP序列，构建VDR-floxed载体。
2.权利要求1所述的VDR基因条件性敲除的同源重组载体在用于VDR基因条件性敲除的floxed小鼠模型构建方法中的应用。
3.一种VDR基因条件性敲除的floxed小鼠模型的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)以小鼠VDR基因组为模版，利用细菌人工染色体在VDR基因外显子3的两侧分别放入Frt-neo-Frt-loxP、loxP序列，构建VDR-floxed载体；
(2)通过基因打靶技术将改造后的VDR基因导入129SV/J小鼠的ES细胞，通过抗药性基因筛选除阳性ES细胞克隆；
(3)将ES细胞导入代孕C57BL/6J小鼠子宫；
(4)胚胎在孕鼠子宫内生长，获得嵌合体小鼠；
(5)将嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠回交获得含有neo基因的杂合子小鼠；
(6)将含有neo基因的杂合子小鼠与Flp小鼠交配，获得去除neo基因的VDR-floxed小鼠。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，其中的VDR-floxed转基因小鼠用于与Cre工具鼠交配，获得组织或细胞特异性VDR基因敲除小鼠避免全身VDR基因敲除产生的致死性限制。
5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，获得的去除neo基因的VDR-floxed小鼠模型用于VDR基因在不同组织局部的病理及生理功能研究中的用途。
6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，获得的去除neo基因的VDR-floxed小鼠模型用于在特定的时间给予诱导剂后实现控制VDR基因敲除的时间特异性、组织特异性研究方法中的用途。
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