[发明专利]一种用于脂肪干细胞的冻存前处理方法

摘要

本发明涉及一种用于脂肪干细胞的冻存前处理方法：1.PBS缓冲液洗涤脂肪组织后进行第一次离心，获取中层组织，将中层组织悬浮于I型胶原酶溶液,之后进行震荡，再进行第二次离心，吸掉上清，得到二次离心细胞微球；2.将二次离心细胞微球悬浮于PBS缓冲液，之后进行过滤，取滤液得到过滤后细胞液，将过滤后细胞液中加入培养基进行重悬得到二次重悬细胞液；3.将二次重悬细胞液中的细胞接种于培养瓶中，无红细胞裂解过程；4.将培养瓶中细胞培养到第二代时，得到第二代细胞培养液，对第二代细胞培养液进行第三次离心，去掉上清后，加入冻存剂，得到终末细胞液，将终末细胞液放入慢速降温冻存盒后置于冰箱，将冰箱内的所述冻存盒转移至液氮罐保存。

主权项

1.一种用于脂肪干细胞的冻存前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：PBS缓冲液洗涤脂肪组织后进行第一次离心，获取中层组织，将所述中层组织悬浮于I型胶原酶溶液,之后进行震荡，再进行第二次离心，吸掉上清，得到二次离心细胞微球；步骤2：将所述步骤1所述二次离心细胞微球悬浮于PBS缓冲液，之后进行过滤，取滤液得到过滤后细胞液，将所述过滤后细胞液中加入培养基进行重新悬浮，得到二次重悬细胞液；步骤3：将所述步骤2中所述二次重悬细胞液中的细胞接种于培养瓶中，无红细胞裂解过程；步骤4：将所述步骤3培养瓶中细胞培养到第二代时，得到第二代细胞培养液，对所述第二代细胞培养液进行第三次离心，去掉上清后，加入冻存剂，得到终末细胞液，在室温下将所述终末细胞液放入慢速降温冻存盒后置于冰箱，最后将所述冰箱内的所述冻存盒转移至液氮罐保存。