[发明专利]一种传染性肌肉坏死病毒的检测方法在审
| 申请号： | 201811636671.1 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109468415A | 公开（公告）日： | 2019-03-15 |
| 发明（设计）人： | 杨苗;林华;李建臻;陈世界;方智;张婧;安微;张妙;薛昌华 | 申请（专利权）人： | 四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 成都弘毅天承知识产权代理有限公司 51230 | 代理人： | 白小明 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种传染性肌肉坏死病毒的检测方法，包括以下步骤：(1)设计特异性引物与探针；(2)优化荧光定量PCR反应体系和反应条件；(3)提取含有目的序列的质粒标准品，作为荧光定量PCR阳性模板，进行荧光定量PCR扩增，获得扩增曲线和标准曲线；(4)提取待测样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR扩增，检测所提取病毒是否为传染性肌肉坏死病毒阳性。本发明以全基因组的5’‑3’的第835个碱基至第901个碱基为目的序列，设计特异性引物和探针，检测灵敏度高、特异性强，且检测结果的重复性高，准确可靠，对操作人员技术要求低，易于实现标准化，尤其适用于出入境对虾的检疫。 | ||
| 搜索关键词： | 传染性肌肉坏死病毒 荧光定量PCR 特异性引物 碱基 扩增 探针 检测 荧光定量PCR反应 检测灵敏度 质粒标准品 标准曲线 待测样品 反应条件 检测结果 扩增曲线 全基因组 人员技术 特异性强 阳性模板 病毒RNA 对虾 标准化 病毒 检疫 优化 | ||
【主权项】：
1.一种传染性肌肉坏死病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)引物设计：查找GenBank中的传染性肌肉坏死病毒的全基因序列，以全基因组的5’‑3’的第835个碱基至第901个碱基为目的序列，使用Primr premier软件设计特异性引物与TaqMan探针，序列如下，方向5’→3’：正向引物：GAAGCCTAAATACACATCGAC；反向引物：CTGCTTCGCTAAAACCTG；探针：AAAACCGGAGCTGACCAC，5’端用Fam标记，3’端用BHQ‑1标记；(2)优化荧光定量PCR反应体系和反应条件；(3)提取含有目的序列的质粒标准品，作为荧光定量PCR阳性模板，进行质粒浓度检测，计算出重组质粒的拷贝数，以10倍稀释度将质粒进行倍比稀释，将其作为标准质粒模板，并设立无模板对照，进行荧光定量PCR扩增，获得扩增曲线和标准曲线；(4)提取待测样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR扩增，检测所提取病毒是否为传染性肌肉坏死病毒阳性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心，未经四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811636671.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
