[发明专利]一种基于小麦种胚注射农杆菌的小麦遗传转化方法

摘要

本发明公开了一种基于小麦种胚注射农杆菌的小麦遗传转化方法，涉及遗传转化技术领域，所述小麦遗传转化方法包括以下步骤：1)受体准备；2)菌悬液制备；3)种胚注射农杆菌转化。为了解决传统的小麦遗传转化技术因需要离体组织培养与再生的过程而导致成本高、周期长且再生率低的问题，本发明通过在种胚内直接注入携带目标基因农杆菌的方法将目标基因导入小麦活体，结合目标基因PCR检测技术得到了可遗传的转基因后代，不需要基因枪等贵重仪器设备，成本低廉，一般实验室均可操作，且具有良好的再生率，无组织培养与再生过程，周期较短，且无小麦基因型依赖问题，同时取材方便，一年四季可以操作。

主权项

1.一种基于小麦种胚注射农杆菌的小麦遗传转化方法，其特征在于，它包括以下步骤：1)受体准备：选取受体的健康种子用蒸馏水进行冲洗，然后用质量浓度为1.5％的次氯酸钠进行浸泡消毒15min，再采用蒸馏水浸泡10min，然后用蒸馏水冲洗种子至无消毒液气味后置于铺两层滤纸的培养皿中，再加水没过种子并在25℃下萌动发芽，得发芽种子A，备用；2)菌悬液制备：将根癌农杆菌进行增殖培养得到菌液，然后在4℃下以4000rpm的速率进行离心10min，再除去上清液并加入YEB培养液，然后加入乙酰丁香酮至终浓度为200μM，再在室温培养12小时进行活化，得农杆菌菌液B，备用；3)种胚注射农杆菌转化：挑取步骤1)中的发芽种子A放至超净工作台风口处风干1小时，然后吸取0.5ml的步骤2)中得到的农杆菌菌液B对发芽种子A进行注射菌液，再将注射过菌液的发芽种子A进行风干30分钟，然后移载至盛有蛭石和草炭的营养钵中，浇透水后在室温下继续培育，即可。