[发明专利]一种维持稳定性、高滴度病毒抗原生产的悬浮细胞病毒的培养方法在审
| 申请号： | 201811585082.5 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109536437A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 张涛;刘月;何召庆;李如珩;徐婉英;武俊兰;王永伟;孙聪;张春辉 | 申请（专利权）人： | 内蒙古必威安泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韩登营 |
| 地址： | 011517 内蒙古自治区*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种维持病毒抗原生产稳定性，提高病毒有效含量的悬浮细胞病毒的培养方法，该方法在细胞培养阶段使用无血清培养方法，一次换液后降低了细胞代谢物对细胞生长的影响及后期病毒生产的干扰，换液后加入硫酸葡聚糖等有效起到提高病毒感染敏感性及细胞分散的作用，后期接毒换液体系中加入PEG6000及高钙溶液提高了接毒效率并大幅增加了口蹄疫病毒的稳定性。制备的病毒液滴度可高达107.0‑109.01ogTCID50/mL，完全抗原146S含量可达6ug/ml以上且培养的口蹄疫病毒更稳定。 | ||
| 搜索关键词： | 口蹄疫病毒 病毒抗原 悬浮细胞 病毒 换液 细胞培养 硫酸葡聚糖 生产稳定性 无血清培养 细胞代谢物 病毒感染 病毒生产 完全抗原 细胞分散 细胞生长 有效含量 病毒液 次换液 高滴度 滴度 高钙 制备 生产 | ||
【主权项】：
1.一种维持稳定性、高滴度病毒抗原生产的悬浮细胞病毒的培养方法，其中，所述方法包括：步骤(1)将悬浮细胞进行稀释传代，培养，使得悬浮细胞处于传代后细胞密度为0.5×106‑0.6×106cells/ml，得到悬浮细胞种子；步骤(2)在生物反应器中接入所述步骤(1)中所述悬浮细胞种子，培养至所述悬浮细胞密度达到≥1‑2×106cells/毫升；步骤(3)从所述步骤(2)中所述细胞密度达到1‑2×106cells/毫升时的悬浮细胞分离掉培养基，替换加入无血清DMEM/F12培养基进行重悬，所述无血清DMEM培养基由以下组分组成：DMEM/F12液体培养基，pH为7.0～7.2，含有1‑3μg/ml胰岛素、1～10μg/ml转铁蛋白、0.2～0.8μg/ml硫酸葡聚糖；步骤(4)培养所述悬浮细胞，使其适应所述无血清DMEM培养基生长环境，之后，加入终浓度0.01‑0.3％v/v的PEG6000，再按MOI＝0.01‑0.1接种口蹄疫病毒；以及步骤(5)继续培养，加入CaCL2溶液，终浓度为6‑12mM。培养，收毒。
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