[发明专利]一种基于微量法的叶绿体复合体Ⅴ活性测定试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种基于微量法的叶绿体复合体Ⅴ活性测定试剂盒及方法，该试剂盒包括试剂一（Tris‑HCl、蔗糖、EGTA）、试剂二（ATP）、试剂三（Tris‑HCl、MgCl₂、KCl、NaCl）、试剂四（TCA）、试剂五（ASA）、试剂六（钼酸铵）、试剂七（硫酸、水）。本发明首次建立了包含叶绿体中复合体Ⅴ提取和活性检测的方法，其原理为复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性；发明通过合理设置对照管，可以排除杂质影响，检测专一性极高；本发明能够有效分离胞浆蛋白、线粒体蛋白和叶绿体蛋白，准确测定位于叶绿体中的复合体Ⅴ活性。本发明重复性较好，变异系数在2％以内。

主权项

1.一种基于微量法的叶绿体复合体Ⅴ活性测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：试剂一，液体100mL×1瓶，由Tris‑HCl、蔗糖、EGTA混合而成，‑20℃保存；试剂二，粉剂×1支，由ATP组成，置于2mL EP管中，‑20℃保存；试剂三，液体8mL×1瓶，由Tris‑HCl、MgCl2、KCl、NaCl混合而成，4℃保存；试剂四，粉剂×1瓶，由TCA组成，置于5mL试剂瓶中，4℃保存；试剂五，粉剂×1瓶，由ASA组成，置于10mL试剂瓶中，4℃保存；试剂六，粉剂×1瓶，由钼酸铵组成，置于10mL试剂瓶中，4℃保存；试剂七，液体10mL×1瓶，由硫酸和水混合而成，置于10mL试剂瓶中，室温保存。