[发明专利]一种利用基因工程菌制备孕烯醇酮的方法在审
| 申请号： | 201811560587.6 | 申请日： | 2018-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN109971815A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 王友富;王荣;王炳乾;王洪福;邵振平;雷灵芝;黄橙橙;王瑞;陈克纲;应杨波 | 申请（专利权）人： | 浙江神洲药业有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/00 | 分类号： | C12P33/00;C07J7/00 |
| 代理公司： | 北京红福盈知识产权代理事务所(普通合伙) 11525 | 代理人： | 邵娜 |
| 地址： | 317300 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种利用基因工程菌制备孕烯醇酮的方法，包括以下步骤：S1：首先选择噬菌粒载体，并对其进行去核处理，将全基因合成的生物酶基因片段孕烯醇酮克隆到高效表达载体中，构建了产孕烯醇酮的基因工程载体，通过紫外线光照诱变处理，获得孕烯醇酮氧化酶高产载体；S2：将步骤S1中所得到的产生载体放入培养基中，在10‑20℃的温度下，培养40‑45h；S3：将步骤S2中培养后的载体加入到50ml二颈瓶中，在室温搅拌下加入浓度为85％的NaHCO3溶液，反应3.5h，再加热至100℃，并搅拌。该利用基因工程菌制备孕烯醇酮的方法，解决了现有的生产方法效率低，不能满足生产需求的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 孕烯醇酮 基因工程菌 制备 高效表达载体 基因工程技术 基因工程载体 全基因合成 噬菌粒载体 紫外线光照 基因片段 生产需求 室温搅拌 诱变处理 培养基 生物酶 氧化酶 再加热 放入 构建 颈瓶 去核 克隆 高产 生产 | ||
【主权项】：
1.一种利用基因工程菌制备孕烯醇酮的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：首先选择噬菌粒载体，并对其进行去核处理，将全基因合成的生物酶基因片段孕烯醇酮克隆到高效表达载体中，构建了产孕烯醇酮的基因工程载体，通过紫外线光照诱变处理，获得孕烯醇酮氧化酶高产载体；S2：将步骤S1中所得到的产生载体放入培养基中，在10‑20℃的温度下，培养40‑45h；S3：将步骤S2中培养后的载体加入到50ml二颈瓶中，在室温搅拌下加入浓度为85％的NaHCO3溶液，反应3.5h，再加热至100℃，并搅拌；S4：将步骤S3中所得到液体中通入乙炔并反应6h，待混合物冷却后，用水稀释，将稀释液用乙醚多次萃取，分液；S5：将步骤S4中所得到乙醚萃取液进行合并，用蒸馏水反复多次洗涤至无色透明状液体；S6：将步骤S5中所得到的无色透明状液体加热，并进行旋转蒸发，再除去乙醚，洗出孕烯醇酮与粗产物。
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