[发明专利]一种沙打旺组织培养再生方法

摘要

本发明涉及组织培养技术领域，尤其是一种沙打旺组织培养再生方法。它包括以下步骤：外植体的选取、外植体的消毒、初始诱导培养、愈伤组织的快速繁殖、叶的诱导分化培养、根的诱导分化培养及炼苗及移栽。本发明以沙打旺种子为外植体，通过在沙打旺组织培养的不同阶段，选配具有不同配方和比例的培养基，利用针‑板高压电场进行辅助配合，使沙打旺愈伤组织进行快速繁殖分化，同时提高沙打旺愈伤组织的叶分化率及根分化率，从而最终提高沙打旺组织再生培养的成活率，形成以沙达旺种子为外植体，利用针‑板高压电场辅助进行快速繁殖分化的沙打旺组培再生体系，提高沙打旺的质量及产量。

主权项

1.一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它包括以下步骤：1)外植体的选取：选取无虫眼成熟饱满的种子为外植体；2)外植体的消毒：用水冲洗后置于经过消毒的的三角瓶中，在三角瓶中加入酒精进行低速振荡消毒10s以上，随后滤干酒精，接着加入升汞溶液低速振荡消毒5min以上，随后滤掉升汞溶液，再用无菌水冲洗3‑5遍；3)初始诱导培养：初始培养基为：含有0.5‑2.0mg/L 2,4‑D、0.5‑2.0mg/L 6‑BA和0.1‑0.5mg/L NAA的MS培养基，将初始培养基消毒后放置48小时以上，随后消毒后的初始培养基放置于三角瓶中，再将刚消毒后的种子接种于初始培养基中，三角瓶的瓶口均用防菌透气膜进行封闭，培养温度25‑28摄氏度，采用暗培养，直至种子萌发出新芽；4)愈伤组织的快速繁殖：将愈伤组织切块并移入培养皿中，培养皿去盖后放入高压电场中，高压电场的平均场强为0.9‑1.1kV/cm，处理时间为30min以上；经高压电场处理后转入愈伤组织培养基上进行继代培养，培养温度25‑28摄氏度，采用光/暗交互培养，光照周期为12‑16h/d，光照强度为2500‑3000lx，愈伤组织培养基为：含有0.3‑1.0mg/L 2,4‑D、0.5‑1.5mg/L 6‑BA和0.1‑0.5mg/L NAA的MS培养基。