[发明专利]一种沙打旺组织培养再生方法

说明书

本发明涉及组织培养技术领域，尤其是一种沙打旺组织培养再生方法。它包括以下步骤：外植体的选取、外植体的消毒、初始诱导培养、愈伤组织的快速繁殖、叶的诱导分化培养、根的诱导分化培养及炼苗及移栽。本发明以沙打旺种子为外植体，通过在沙打旺组织培养的不同阶段，选配具有不同配方和比例的培养基，利用针‑板高压电场进行辅助配合，使沙打旺愈伤组织进行快速繁殖分化，同时提高沙打旺愈伤组织的叶分化率及根分化率，从而最终提高沙打旺组织再生培养的成活率，形成以沙达旺种子为外植体，利用针‑板高压电场辅助进行快速繁殖分化的沙打旺组培再生体系，提高沙打旺的质量及产量。

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，尤其是一种沙打旺组织培养再生方法。

背景技术

沙打旺(Astragalus adsurgens Pall.)，别名直立黄芪，为豆科(Leguminosae)黄芪属多年生草本植物，又名直立黄芪、麻豆秧。沙打旺作饲料的营养价值较高，可直接作马、牛、羊、骆驼、猪、兔子等大小牲畜青饲料，也可制成青贮、干草和发酵饲料。沙打旺还可直接压青作基肥，异地压青作追肥，或以其秸秆制作堆、沤肥。此外，沙打旺防风固沙能力强，在黄河故道等风沙危害严重的地区，种植沙打旺可减少风沙危害、保护果林、防止水土流失和改良土壤。沙打旺是我国特有的栽培牧草、绿肥，其适应性强，具有抗旱、耐贫瘠、固沙等特点，是水土保持、恢复沙地荒地的重要物种。

近年来，内蒙古乃至全国的生态环境建设及畜草业发展对沙打旺的需求不断增大，但由于沙达旺的生育期长且兼有白花授粉和异花授粉的习性，导致其花期不集中，最终造成种子的质量很差，产量较低，直接影响了其推广与应用。传统的组培模式中愈伤组织生长速度较慢，易褐化，分化率较低。

因此，有必要对现有的沙达旺组织培养模式提出改进方案，建立以沙达旺种子为外植体，利用针-板高压电场辅助进行快繁分化的沙打旺组培再生体系。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种以种子为外植体，利用针-板高压电场辅助进行快繁分化的沙打旺组织培养再生方法，为提高沙打旺组织的繁殖速度和产量、促进其在全国生态环境建设及畜草业发展发挥更大作用提供了技术支持。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种沙打旺组织培养再生方法，它包括以下步骤：

1)外植体的选取：选取无虫眼成熟饱满的种子为外植体；

2)外植体的消毒：用水冲洗后置于经过消毒的的三角瓶中，在三角瓶中加入酒精进行低速振荡消毒10s以上，随后滤干酒精，接着加入升汞溶液低速振荡消毒5min以上，随后滤掉升汞溶液，再用无菌水冲洗3-5遍；

3)初始诱导培养：初始培养基为：含有0.5-2.0mg/L 2，4-D、0.5-2.0mg/L6-BA和0.1-0.5mg/L NAA的MS培养基，将初始培养基消毒后放置48小时以上，随后消毒后的初始培养基放置于三角瓶中，再将刚消毒后的种子接种于初始培养基中，三角瓶的瓶口均用防菌透气膜进行封闭，培养温度25-28摄氏度，采用暗培养，直至种子萌发出新芽；

4)愈伤组织的快速繁殖：将愈伤组织切块并移入培养皿中，培养皿去盖后放入高压电场中，高压电场的平均场强为0.9-1.1kV/cm，处理时间为30min以上；

经高压电场处理后转入愈伤组织培养基上进行继代培养，培养温度25-28摄氏度，采用光/暗交互培养，光照周期为12-16h/d，光照强度为2500-3000lx，愈伤组织培养基为：含有0.3-1.0mg/L 2，4-D、0.5-1.5mg/L 6-BA和0.1-0.5mg/L NAA的MS培养基。

优选地，所述初始培养基为：含有1.0mg/L 2,4-D、1.0mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA的MS培养基。