[发明专利]一种沙打旺组织培养再生方法

权利要求书

1.一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它包括以下步骤：

1)外植体的选取：选取无虫眼成熟饱满的种子为外植体；

2)外植体的消毒：用水冲洗后置于经过消毒的的三角瓶中，在三角瓶中加入酒精进行低速振荡消毒10s以上，随后滤干酒精，接着加入升汞溶液低速振荡消毒5min以上，随后滤掉升汞溶液，再用无菌水冲洗3-5遍；

3)初始诱导培养：初始培养基为：含有0.5-2.0mg/L 2,4-D、0.5-2.0mg/L 6-BA和0.1-0.5mg/L NAA的MS培养基，将初始培养基消毒后放置48小时以上，随后消毒后的初始培养基放置于三角瓶中，再将刚消毒后的种子接种于初始培养基中，三角瓶的瓶口均用防菌透气膜进行封闭，培养温度25-28摄氏度，采用暗培养，直至种子萌发出新芽；

4)愈伤组织的快速繁殖：将愈伤组织切块并移入培养皿中，培养皿去盖后放入高压电场中，高压电场的平均场强为0.9-1.1kV/cm，处理时间为30min以上；

经高压电场处理后转入愈伤组织培养基上进行继代培养，培养温度25-28摄氏度，采用光/暗交互培养，光照周期为12-16h/d，光照强度为2500-3000lx，愈伤组织培养基为：含有0.3-1.0mg/L 2,4-D、0.5-1.5mg/L 6-BA和0.1-0.5mg/L NAA的MS培养基。

2.如权利要求1所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：所述初始培养基为：含有1.0mg/L 2,4-D、1.0mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA的MS培养基。

3.如权利要求1所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：所述愈伤组织培养基为：含有0.5mg/L 2,4-D、1.0mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA的MS培养基。

4.如权利要求1所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：所述步骤4)中的高压电场为针-板高压电场，所述针-板高压电场采用上极为接交流高压的高压针极且下极为接地平板。

5.如权利要求4所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它还包括步骤5)叶的诱导分化培养：将上述继代培养的愈伤组织放入高压电场中处理，平均场强为1.4-1.6kV/cm，处理时间为30min以上；经高压电场处理后转入生叶培养基上培养，培养温度25-28摄氏度，采用光/暗交互培养，光照周期为12-16h/d，光照强度为2500-3000lx，生叶培养基为：含有1.5-2.5mg/L 6-BA、0.5-1.0mg/L NAA、0.5-1.5mg/L KT和0.1-0.5mg/L IBA的MS培养基。

6.如权利要求5所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：所述生叶培养基为：含有2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、1.0mg/L KT和0.2mg/L IBA的MS培养基，所述步骤5)中的高压电场为针-板高压电场。

7.如权利要求5所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它还包括步骤6)根的诱导分化培养：将上述经叶的诱导分化培养后的愈伤组织放入针-板高压电场中，平均场强为1.4-1.6kV/cm，处理时间为30min以上；经高压电场处理后转入生根培养基培养，培养温度25-28摄氏度，采用光/暗交互培养，光照周期为12-16h/d，光照强度为2500-3000lx，生根培养基为：含有0.5-1.0mg/L NAA和0.5-1.5mg/L BAT的MS培养基。

8.如权利要求7所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：所述生根培养基为：含有0.5mg/L NAA和1.0mg/L BAT的MS培养基。

9.如权利要求7所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它还包括步骤7)炼苗及移栽：待根的诱导分化培养后形成的组培苗生长至6-8cm时，打开三角瓶上的无菌透气膜炼苗7天以上，炼苗后移栽到花卉营养土中正常培养，移栽后每6-7天浇水一次。

10.如权利要求4-7中任一项所述的一种沙打旺组织培养再生方法，其特征在于：它包括一超净工作台，所述高压针极包括上极板和设置在上极板的下表面且呈间隔分布的放电针体，所述上极板和接地平板均设置于超净工作台内且呈上下对位分布，所述上极板连接有一交流高压模块，所述交流高压模块受控于一中央控制模块，所述中央控制模块用于控制交流高压模块向上极板输送交流高压以在放电针体和接地平板之间形成针-板高压电场。