[发明专利]大豆种子蛋白表达谱的构建方法及大豆蛋白表达谱在分析生物代谢途径中的应用

摘要

本发明提供了大豆蛋白表达谱的构建方法及大豆蛋白表达谱在分析生物代谢途径中的应用，属于蛋白表达谱构建技术领域。本发明采用SDS‑PAGE等技术得到大豆蛋白电泳胶片，通过对大豆蛋白电泳胶片分级，对分级蛋白分别进行胰蛋白酶酶解和液相色谱法质谱联用(LC‑MS)鉴定大豆蛋白的种类和含量。大豆蛋白根据电泳进行分级鉴定，有助于检测低含量的蛋白，避免低丰度的蛋白被高丰度蛋白覆盖，从而得到更多蛋白。通过对大豆蛋白的分级鉴定，从生物信息学的角度出发找到大豆蛋白的功能特征，并进行蛋白的分类与数据库构建，为从事大豆蛋白相关研究提供技术和数据支撑。

主权项

1.一种大豆蛋白表达谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将大豆材料、抽提缓冲液和巯基乙醇混合，振荡，离心，收集的上清液为大豆总蛋白；2)将所述步骤1)中的大豆总蛋白在SDS‑PAGE凝胶中进行不连续垂直电泳2～3h，得到大豆蛋白电泳凝胶；所述SDS‑PAGE凝胶中浓缩胶的质量浓度为3.5％～5％，SDS‑PAGE凝胶中分离胶的质量浓度为12％；3)将所述步骤2)中的大豆蛋白电泳凝胶依次进行染色和脱色液脱色，得到大豆蛋白电泳胶片；4)将所述大豆蛋白电泳胶片进行划分成19级，得到19级胶条；所述划分的标准是按照大分子量到小分子量的顺序对大豆蛋白电泳胶片依次切胶条，将明显的蛋白条带单独切作一级，将弥散的蛋白条带切为一级；5)将得到的19级胶条采用脱色剂分别进行脱色处理，将脱色19级胶条分别进行胰蛋白酶溶液水解，得到19级肽段；6)将所述步骤5)中19级肽段中的每一级肽段进行质谱分析，将得到的质谱数据原始文件采用Maxquant法在Photozome大豆蛋白数据库中进行搜库，得到大豆种子蛋白表达谱。