[发明专利]一种悬浮培养白及细胞的方法有效
| 申请号： | 201811481695.4 | 申请日： | 2018-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109496860B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 徐德林;张社波;潘胤池;李林;冷昌尉;沈访;上官艳妮;刘厚伯 | 申请（专利权）人： | 遵义医科大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 张显琴 |
| 地址： | 563000 *** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本方案公开了中药材药物研究技术领域的一种悬浮培养白及细胞的方法，该方法中将白及种子诱导并继代后得到的愈伤组织作为外植体，接种到悬浮培养基中进行悬浮培养，悬浮培养基为MS+6‑苄氨基嘌呤1.5±0.45mg/L+2,4‑二氯苯氧乙酸2.5±0.5mg/L+30±20g/L蔗糖；悬浮培养基pH为5.9±0.1；外植体接种量与培养基的体积比例为1/80～1/20g/mL；接种后在转速为110±10r/min、温度为25±2℃的黑暗条件下进行40～50天振荡悬浮培养。本方案采用细胞组织悬浮培养的方法，将白及种子诱导并继代后的愈伤组织作为外植体进行悬浮培养，该方法不仅可以为细胞水平规模化培养白及，进一步为白及工业化生产和化学成分高效生物合成提供实验依据和理论基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 悬浮 培养 白及 细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种悬浮培养白及细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、取成熟的白及蒴果进行无菌消毒，并获取白及种子；步骤二、诱导白及种子萌发获取愈伤组织：将白及种子放于无菌的诱导培养基中在黑暗条件下培养，培养温度为25±2℃，培养时间为60～90天；诱导培养基为：MS+6‑苄氨基嘌呤1.5±0.5mg/L+2,4‑二氯苯氧乙酸2.5±0.5mg/L+30±20g/L蔗糖+7±1g/L琼脂，诱导培养基的pH为5.9±0.1；步骤三、接种：将步骤二培养获取的愈伤组织接种到继代培养基中在黑暗条件下培养，继代培养基为：MS+6‑苄氨基嘌呤1.5±0.5mg/L+2,4‑二氯苯氧乙酸2.5±0.5mg/L+30±20g/L蔗糖+7±1g/L琼脂，继代培养基的pH为5.9±0.1；接种培养的温度为25±2℃，时间为25～45天后得到外植体；步骤四、悬浮培养：将步骤三得到的外植体接种到悬浮培养基中进行悬浮培养，悬浮培养基为MS+6‑苄氨基嘌呤1.5±0.45mg/L+2,4‑二氯苯氧乙酸2.5±0.5mg/L+30±20g/L蔗糖；悬浮培养基的pH为5.9±0.1；外植体的接种量与培养基的体积比例为1/80～1/20g/mL；接种后在转速为110±10r/min、温度为25±2℃的黑暗条件下进行振荡悬浮培养，悬浮培养时间为40～50天。
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