[发明专利]溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒在审
| 申请号： | 201811469487.2 | 申请日： | 2018-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN109517832A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 张月梅;赵世华;宋越;戴伶俐;王娜;刘威;张帆;杨斌;达来宝力格;陈伟 | 申请（专利权）人： | 内蒙古自治区农牧业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70;C07K14/195;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 010000 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明提供了溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒，属于基因工程领域。本发明首次将溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白构建入原核表达载体中，得到溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白的原核表达载体，通过重组表达得到检测溶血性曼氏杆菌的抗原标志物‑PlpE蛋白，且表达的PlpE蛋白经Western Blot分析得到47KDa的目的条带。实验表明，以PlpE蛋白为抗原与大肠杆菌、链球菌、肺炎支原体三种细菌阳性血清进行免疫反应，结果发现均表现为阴性。这说明本发明提供的溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白具有良好的特异性，能够用来作为抗原标志物检测溶血性曼氏杆菌。 | ||
| 搜索关键词： | 溶血性曼氏杆菌 蛋白 蛋白原核表达 原核表达载体 检测 抗原标志 试剂盒 构建 基因工程领域 大肠杆菌 链球菌 肺炎支原体 蛋白构建 阳性血清 重组表达 抗原 条带 阴性 细菌 表现 发现 分析 | ||
【主权项】：
1.溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法，包括以下步骤：1)以plp e‑F、plpe‑R为引物，以溶血性曼氏杆菌的总DNA为模板进行PCR扩增，得到PlpE蛋白编码基因的PCR产物；所述plp e‑F具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述plp e‑R具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；2)将所述PlpE蛋白编码基因的PCR产物和质粒载体分别进行NdeI’和XhoI酶切，得到PlpE蛋白编码基因酶切片段和质粒载体酶切片段；3)将所述PlpE蛋白编码基因酶切片段和载体酶切片段连接，得到连接产物；4)将所述连接产物转化至大肠杆菌的感受态中，得到溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体。
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