[发明专利]一种脂质体制备方法

摘要

本发明揭示了一种脂质体的制备方法，包括以下步骤，首先是合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物，其次是合成具有两亲性分子的钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺，然后是脂质体壳层的形成、药物自组装，最后是制备得到脂质体材料，本发明通过自组装和纳米沉淀的方法制备得到具有核壳结构的脂质体，工艺简单、可重复性强，且形成的该脂质体颗粒尺寸均一，具有良好的水溶性、分散性和生物相容性，克服钆类小分子生物相容性差，组织特异性低，毒性大等缺陷，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。

主权项

1.一种脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1: 合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4~10 ml的硬脂胺的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到的N,N‑二甲基甲酰胺中溶解形成5~10 ml二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N‑二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N‑二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40 °C下搅拌2~3 h后，置于4 °C下冷却2~3 h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；S2: 合成具有两亲性分子的钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺：将六水氯化钆的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺含量的比例为1~3:1，在N2气氛中室温下搅拌反应2~4 h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺；S3：形成脂质体壳层：将质量比为3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑叶酸、及步骤S2中的所述钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺混合溶解于3~6 ml含有4%乙醇的水溶液中，并加热至50~60 ℃形成热脂质溶液；S4: 药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4~8 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4~8 mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、浓度为2.5~4 mg/ml的吲哚菁绿的N,N‑二甲基甲酰胺溶液、及浓度为2.5~4 mg/ml的阿霉素的二甲亚砜溶液混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并涡旋5~10 min；S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4 °C冰水浴中超声，恢复至室温后继续搅拌涡旋5~10 min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水多次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体材料。