[发明专利]一种脂质体制备方法

权利要求书

1.一种脂质体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1:合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4～10ml的硬脂胺的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到的N,N-二甲基甲酰胺中溶解形成5～10ml二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40℃下搅拌2～3h后，置于4℃下冷却2～3h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；

S2:合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将六水氯化钆的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1～3:1，在N₂气氛中室温下搅拌反应2～4h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺；

S3：形成脂质体壳层：将质量比为3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸、及步骤S2中的所述钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于3～6ml含有4％乙醇的水溶液中，并加热至50～60℃形成热脂质溶液；

S4:药物自组装：将质量比为4:1的月桂酸与硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得浓度为4～8mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；将浓度为4～8mg/ml的月桂酸与硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、浓度为2.5～4mg/ml的吲哚菁绿的N,N-二甲基甲酰胺溶液、及浓度为2.5～4mg/ml的阿霉素的二甲亚砜溶液混合，并逐滴加入到步骤S3中所述的热脂质溶液形成脂质溶液，并涡旋5～10min；

S5：制备得到脂质体材料：将步骤S4中的脂质溶液在4℃冰水浴中超声，恢复至室温后继续搅拌涡旋5～10min，再通过超滤洗涤将步骤S4中的脂质溶液用超纯水多次洗涤，以除去未被包覆的吲哚菁绿、阿霉素和有机溶剂，得到均匀分散的温敏性脂质体材料。

2.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的清洗剂包括丙酮及氯仿，且清洗的顺序为丙酮清洗和氯仿清洗。

3.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S2中缓冲液为盐酸与氢氧化钠的混合液或三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S2中调节至中性后的柠檬酸钆溶液的pH至为7～7.4。

5.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S5中脂质溶液在4℃冰水浴中超声的超声时间为10～20min。

6.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S5中超滤洗涤的截留分子量为10KDa，转速为8000～10000rpm。

7.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述步骤S5中得到的温敏性脂质体材料还需经过无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤。

8.根据权利要求7所述的脂质体制备方法，其特征在于：所述无表面活性剂的醋酸纤维素膜过滤的过滤孔径为0.22～0.45μm。