[发明专利]一种脂质体制备方法

说明书

本发明揭示了一种脂质体的制备方法，包括以下步骤，首先是合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物，其次是合成具有两亲性分子的钆‑二亚乙基三胺五乙酸‑硬脂胺，然后是脂质体壳层的形成、药物自组装，最后是制备得到脂质体材料，本发明通过自组装和纳米沉淀的方法制备得到具有核壳结构的脂质体，工艺简单、可重复性强，且形成的该脂质体颗粒尺寸均一，具有良好的水溶性、分散性和生物相容性，克服钆类小分子生物相容性差，组织特异性低，毒性大等缺陷，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。

技术领域

本发明涉及一种脂质体的制备方法，尤其涉及一种具有多功能特性的脂质体的制备方法，属于生物医学领域。

背景技术

磁共振成像(MRI)技术是利用原子核的磁共振效应衍生出的成像技术，具有空间分辨率高、软组织对比度高、非侵入性和无电离辐射伤害等特点，因而被广泛应用于临床诊断和治疗中。在临床MRI中，多数诊断须用磁共振造影剂，磁共振造影剂是用来缩短成像时间、提高成像对比度和清晰度的一种成像增强对比剂，它能改变体内局部组织中水质子的驰豫速率、提高正常与患病部位的成像对比度。磁共振造影剂的发展也促进MRI技术日趋成熟。

另外，近年来，许多近红外响应释放药物的多功能纳米探针被开发用于癌症的协同治疗，例如：化疗或光疗，但这些纳米探针在近红外刺激下，仅能实现封装药物的持续释放，而不能实现可控和按需释放，造成病灶特异性低，治疗效果差等问题。

然而，目前临床使用最多的造影剂，如钆类造影剂、钆双胺(Gd-DTPA-BMA,)1,4,7-三(叔丁氧羰甲基)-10-(乙酸)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷(Gd-DOTA)等都是小分子造影剂，属于细胞外试剂，存在组织特异性较低，体内停留时间短，组织毒性较大等缺点。

综上所述，如何提供一种脂质体的制备方法，应用于生物医学，可以构建靶向特异性、低毒、生物相容的MRI造影剂，就成为本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种将两种天然脂肪酸低共熔物构成的温敏性脂质体与顺磁性钆类两亲小分子相结合，通过包覆光热/光动力试剂吲哚菁绿(ICG)与化疗药物阿霉素(DOX)，形成可用于生物医学领域的磁共振成像的有机纳米粒子，同时，利用近红外光照射间接引发脂肪酸发生相转变，可控地释放出化疗药物，实现了多模态成像引导的协同治疗。

本发明的技术解决方案是：

根据本发明的一个方面，提出一种脂质体制备方法，包括以下步骤：

S1:合成二亚乙基三胺五乙酸衍生物：将硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4～10ml的硬脂胺的氯仿溶液；将二亚乙基三胺五乙酸双酐放入到N,N-二甲基甲酰胺中溶解形成5～10ml的二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再将硬脂胺的氯仿溶液缓慢加入到二亚乙基三胺五乙酸双酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺与二亚乙基三胺五乙酸双酐的摩尔比为2～4：1，并在40℃下搅拌2～3h后，置于4℃下冷却2～3h，过滤得到二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通过清洗剂清洗所述白色沉淀以除去未反应的二亚乙基三胺五乙酸双酐和硬脂胺；

S2:合成具有两亲性分子的钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺：将六水氯化钆的水溶液加入到柠檬酸钠的水溶液中，其中，六水氯化钆与柠檬酸钠的摩尔比为1:2～4，得到柠檬酸钆溶液；用缓冲液调节所述柠檬酸钆溶液的pH至中性，再将调节至中性后的柠檬酸钆溶液缓慢加入到热的步骤S1中所述二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金属钆与二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例为1～3:1，在N₂气氛中室温下搅拌反应2～4h后过滤产物，沉淀物干燥过夜，即得到钆-二亚乙基三胺五乙酸-硬脂胺；