[发明专利]利用pAd-Easy1腺病毒载体系统构建牛MEF2A基因过表达病毒的方法在审
| 申请号： | 201811453011.X | 申请日： | 2018-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN109576306A | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 王亚宁;昝林森;杨武才 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/12;C12N7/01 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用pAd‑Easy1腺病毒载体系统构建牛MEF2A基因过表达病毒的方法，该方法首先通过PCR技术克隆牛MEF2A基因CDS区全长序列并构建到pAdTrack‑CMV载体上，得到pAdTrack‑Mef2a基因克隆载体，然后与腺病毒骨架载体pAd‑Easy1在BJ5183感受态细胞中同源重组，组建病毒重组子pAd‑Mef2a，最后将病毒重组子pAd‑Mef2a转染到293A细胞中，经包装、扩繁、鉴定，得到高滴度的牛MEF2A基因过表达腺病毒。该牛MEF2A基因过表达腺病毒可以实现牛MEF2A基因在细胞中的高丰度表达，为今后在细胞水平上研究MEF2A的功能及其作用机制提供基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基因过表达 构建 腺病毒载体系统 病毒重组 腺病毒 腺病毒骨架载体 基因克隆载体 病毒 感受态细胞 细胞 全长序列 同源重组 细胞水平 作用机制 基因 高滴度 高丰度 扩繁 转染 组建 研究 | ||
【主权项】：
1.一种利用pAd‑Easy1腺病毒载体系统构建牛MEF2A基因过表达病毒的方法，其特征在于，按下列步骤进行：步骤一，在NCBI数据库中查询牛MEF2A基因序列，设计包含酶切位点在内的引物，通过PCR技术克隆牛MEF2A基因CDS全长序列；步骤二，将牛MFE2A基因连接到pMD‑19T‑Simple载体上，通过转化入DH5α大肠杆菌感受态细胞，并挑选阳性细胞克隆进行质粒提取、测序，得到pMD‑19T‑MEF2A基因克隆载体；步骤三，将牛MEF2A基因构建到pAdTrack‑CMV载体上，得到pAdTrack‑Mef2a，然后与腺病毒骨架载体pAd‑Easy1在BJ5183感受态细胞中同源重组，组建病毒重组子pAd‑Mef2a；步骤四，将病毒重组子pAd‑Mef2a转染到293A细胞中，进行腺病毒的包装、扩繁、鉴定，得到高滴度的牛MEF2A基因过表达腺病毒。
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