[发明专利]利用pAd-Easy1腺病毒载体系统构建牛MEF2A基因过表达病毒的方法

权利要求书

1.一种利用pAd-Easy1腺病毒载体系统构建牛MEF2A基因过表达病毒的方法，其特征在于，按下列步骤进行：

步骤一，在NCBI数据库中查询牛MEF2A基因序列，设计包含酶切位点在内的引物，通过PCR技术克隆牛MEF2A基因CDS全长序列；

步骤二，将牛MFE2A基因连接到pMD-19T-Simple载体上，通过转化入DH5α大肠杆菌感受态细胞，并挑选阳性细胞克隆进行质粒提取、测序，得到pMD-19T-MEF2A基因克隆载体；

步骤三，将牛MEF2A基因构建到pAdTrack-CMV载体上，得到pAdTrack-Mef2a，然后与腺病毒骨架载体pAd-Easy1在BJ5183感受态细胞中同源重组，组建病毒重组子pAd-Mef2a；

步骤四，将病毒重组子pAd-Mef2a转染到293A细胞中，进行腺病毒的包装、扩繁、鉴定，得到高滴度的牛MEF2A基因过表达腺病毒。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的引物序列如下：

上游引物：

下游引物：

其中，黑色下划线标记表示酶切位点的保护碱基，上游引物黑色加粗部分的标记表示KpnⅠ酶切位点，上游引物黑色下划线标记表示Kozak序列，下游引物黑色加粗部分的标记表示HindⅢ酶切位点。