[发明专利]高效酶催化合成血根碱与白屈菜红碱的方法有效
| 申请号： | 201811423227.1 | 申请日： | 2018-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN109468351B | 公开（公告）日： | 2020-07-14 |
| 发明（设计）人： | 黄鹏;曾建国 | 申请（专利权）人： | 湖南美可达生物资源股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P17/18 | 分类号： | C12P17/18;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 长沙楚为知识产权代理事务所(普通合伙) 43217 | 代理人： | 陶祥琲 |
| 地址： | 410331 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 一种高效酶催化合成血根碱和白屈菜红碱的方法，其分别从已知的普罗托品‑6‑羟基化酶基因、二氢苯并菲啶氧化酶基因及细胞色素P450还原酶基因中通过异源表达和结果比对分析，筛选出表达效率高的最优基因，然后对选出的最优基因进行密码子优化；再将优化基因序列构建到表达载体上，之后转入酵母工程菌中进行转化获得重组酵母工程菌株；最后用博落回的叶片原料液前体饲喂重组酵母工程菌进行发酵，即得。本发明从基因水平、发酵工艺等多方面上提高血根碱和白屈菜红碱的酶催化效率，利用博落回的非传统药用部位叶片原料液直接与工程菌进行发酵，将叶片中生物碱含量高的原阿片碱和别隐品碱转化成高价值的血根碱和白屈菜红碱，以实现博落回资源的综合利用。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 催化 合成 血根碱 白屈菜 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高效酶催化合成血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1、对参与血根碱和白屈菜红碱生物合成的基因进行密码子优化：首先根据血根碱和白屈菜红碱的生物合成途径，分别从已知的普罗托品‑6‑羟基化酶基因、二氢苯并菲啶氧化酶基因及细胞色素P450还原酶基因中通过异源表达和结果比对分析，分别筛选出表达效率高的最优基因，然后对筛选出的最优基因进行密码子优化；S2、将优化后的基因序列构建到表达载体上，然后转入酵母工程菌中进行转化获得重组酵母工程菌株；S3、将博落回的叶片原料液与步骤S3构建的重组酵母工程菌进行发酵，然后收集培养后的酵母工程菌，裂解菌体、分离纯化，即得血根碱和白屈菜红碱。
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