[发明专利]基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B12的方法

摘要

本发明涉及一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B12的方法，将利用维生素B12生产菌株的种子进行培养活化得到的维生素B12生产菌株扩培在SLB培养基中，将维生素B12生产菌株进行离心处理得到的生产维生素B12的沉淀菌株经过洗涤后接种在维生素B12检测培养基中，并在维生素B12检测培养基中使用了经过过滤冷灭菌方法预处理的木糖母液作为原料，在生产维生素B12的沉淀菌株发酵过程中，间歇性地对维生素B12检测培养基中发酵液实施光照处理，能够明显提高维生素B12生产菌株维生素B12的产量。本发明还具有操作简单、技术难度低等特点。

主权项

1.一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B₁₂的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将维生素B₁₂生产菌株的种子进行培养活化，然后将活化后的维生素B₁₂生产菌株接种5%至SLB培养基中扩培后置于4 ℃温度下待用；步骤二、采用过滤冷灭菌方法对木糖母液先进行预处理；步骤三、将步骤一中扩培得到的维生素B₁₂生产菌株进行离心处理，弃上清液得到生产维生素B₁₂的沉淀菌株，将该沉淀菌株进行洗涤；步骤四、将洗涤后的生产维生素B₁₂的沉淀菌株接种至含有步骤二预处理后的木糖母液为培养基原料的维生素B₁₂检测培养基中，与木糖母液一起进行发酵处理，同时将该维生素B₁₂检测培养基静置于黑暗环境中65 h~80 h，而且，在距离维生素B₁₂检测培养基10‑50 cm处设置光源，所述光源对维生素B₁₂检测培养基进行间歇性照射，光源每次光照时间持续10 min~80 min，其光照时间与黑暗时间的比例为1:2~5:1；步骤五、将步骤四发酵处理后的发酵溶液进行细胞破碎处理，再将细胞破碎处理后的发酵液进行低温离心处理，离心后得到含维生素B₁₂的上清液，向该上清液中加入稀氰化钠溶液，再将处理后的上清液通过SPE柱萃取方式萃取维生素B₁₂，收集萃取后含有维生素B₁₂的洗脱液，用氮气吹干，洗脱液干燥后的产物即为维生素B₁₂。