[发明专利]基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B12的方法

说明书

本发明涉及一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B₁₂的方法，将利用维生素B₁₂生产菌株的种子进行培养活化得到的维生素B₁₂生产菌株扩培在SLB培养基中，将维生素B₁₂生产菌株进行离心处理得到的生产维生素B₁₂的沉淀菌株经过洗涤后接种在维生素B₁₂检测培养基中，并在维生素B₁₂检测培养基中使用了经过过滤冷灭菌方法预处理的木糖母液作为原料，在生产维生素B₁₂的沉淀菌株发酵过程中，间歇性地对维生素B₁₂检测培养基中发酵液实施光照处理，能够明显提高维生素B₁₂生产菌株维生素B₁₂的产量。本发明还具有操作简单、技术难度低等特点。

技术领域

本发明微生物发酵技术领域，特别涉及一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B₁₂的方法。

背景技术

自然界中维生素B₁₂只能由微生物合成，主要是细菌和放线菌，细菌以丙酸杆菌、脱氮假单胞菌为主，放线菌主要是链霉菌属。维生素B₁₂早先是从抗生素废液中提取的，但是提取的效率低。化学合成又极其复杂，成本很高，关键是得到的产物纯度低，具有大量副产物，不适合产业化。

目前工业化生产维生素B₁₂主要使用微生物发酵法，因此一种提高产量对于发酵生产维生素B₁₂具有重大意义。公布号CN102453690A的中国专利中公开了一种脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂高产菌株的诱变方法，通过诱变筛选的方法获取维生素B₁₂高产菌株，该方法的主要缺点是诱变存在不确定性，且技术要求高。公告号CN108251476A的中国专利中公开了从酶制剂废水中提取维生素B₁₂的方法，以酶制剂废水为原料，经过一系列处理后提取维生素B₁₂，该方法主要的缺点是酶制剂废水需经过多道工序处理，相对比较复杂。YUE YU等人（Yue Yu、Xuan Zhu、etc，Enhancing the vitamin B₁₂ production and growth ofPropionibacterium freudenreichii in tofu wastewater via a light-inducedvitamin B₁₂ riboswitch，Appl Microbiol Biotechnol，DOI 10.1007/s00253-015-6958-6）已经研究发现，蓝光通过激发维生素B₁₂核糖体开关可以提高豆腐废水发酵过程中维生素B₁₂的产量，但是该研究发酵过程中在豆腐废水中添加了硫酸钴，而已有研究表明钴化合物能够增加维生素B₁₂的合成。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B₁₂的方法，提高维生素B₁₂生产菌株在木糖母液培养基中维生素B₁₂产量，操作简单、技术难度低，在不添加能够增加维生素B₁₂产量物质的情况下，利用光照提高维生素B₁₂的产量。

本发明是这样实现的，提供一种基于光照调控的木糖母液微生物发酵维生素B₁₂的方法，包括如下步骤：

步骤一、将维生素B₁₂生产菌株的种子进行培养活化，然后将活化后的维生素B₁₂生产菌株接种5%至SLB培养基中扩培后置于4 ℃温度下待用；

步骤二、采用过滤冷灭菌方法对木糖母液先进行预处理；