[发明专利]一种提高烟叶提取物中还原酶酶活的提取方法

摘要

本申请属于烟草代谢物技术领域，具体涉及一种提高烟叶提取物中还原酶酶活的提取方法专利申请事宜。该方法针对新鲜烟叶中还原酶的提取，具体包括：制备提取液（采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS）、烟叶预处理、溶液法提取等步骤。初步测定结果表明，经过相关提取工艺参数优化后，提取液中GSR酶活得到了较好提高，可达2.3×10^‑3U/μg全蛋白，而NR酶活可达6.2×10^‑3U/μg全蛋白，达到了减少杂质蛋白干扰、提升GSR酶和NR酶含量的目的。同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短（仅1.5 h左右），因此使得本申请具有较好的科研价值，可为GSR和NR活性分析及其它相关蛋白分析和研究奠定技术基础。

主权项

1.一种提高烟叶提取物中还原酶酶活的提取方法，其特征在于，该方法针对新鲜烟叶中还原酶的提取，具体包括如下步骤：（1）制备提取液，具体采用裂解液RIPA、NEB或PBS；配方组成为：裂解液RIPA ：pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM，EDTA、1mM，SDS、0.1%，NaCl、150 mM，NP‑40、1%，PMSF、1 mM；缓冲液NEB：pH 7.5 的Hepes、20mM，KCl、40 mM，EDTA、1 mM，PMSF、1 mM；（2）烟叶预处理将烟草8‑12叶期的新鲜烟叶，研磨成粉备用；（3）溶液法提取在步骤（2）研磨成粉烟叶样品中加入步骤（1）中制备的提取液，震荡混匀后，冰上静置不少于1h；具体用量方面，研磨成粉烟叶样品100mg，提取液用量为500μl‑1mL；静置完成后，5000~15000rpm离心不少于20min，保留上清液，即为含有还原酶酶活的提取液。