[发明专利]一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法

摘要

本发明具体涉及一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法。以Fe₃O₄磁性纳米粒为中心，表面偶联蓝荧光发射碳量子点B‑CDs，在Fe₃O₄/B‑CDs表面生长负载了模板分子藻红蛋白的SiO₂壳层，洗脱模板分子制得磁性分子印迹核/壳聚合物Fe₃O₄/B‑CDs/SiO₂‑MIPs。测定不同藻红蛋白浓度下该聚合物分散液荧光发射光谱，拟合藻红蛋白与B‑CDs荧光发射峰强度比率I_藻红蛋白/I_B‑CDs与藻红蛋白摩尔浓度之间的线性关系，构建藻红蛋白比率荧光传感器。与现有技术相比，本发明方法操作简单，成本低，原料易得，比率信号抗干扰能力强，准确性好，灵敏度和选择性高，可发展成为一种新颖的比率荧光传感器用于藻红蛋白的高效检测。

主权项

1.一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)氨基化蓝荧光发射B‑CDs的制备：取0.3mL乙二醚和25mL儿茶酚溶液超声混匀，转入50mL聚四氟乙烯内胆的高压反应釜中，在180℃下加热反应12h，将制得的深棕色混合液用20mL二次蒸馏水稀释，以12000rpm转速离心除去较大颗粒，收集上清液并采用0.4μm微滤膜过滤，滤液采用截留分子量1000Da透析袋透析处理以清除未反应实验原料，将透析袋中溶液倒出，采用旋转蒸发除去90％的液体，再真空干燥得到B‑CDs，在4℃避光条件下储存，或分散在溶液中制备B‑CDs的分散液用于后续实验；(2)羧基化Fe3O4磁性纳米粒的制备：向250mL反应瓶中加入摩尔比为2:1的氯化铁和氯化亚铁配成100mL混合溶液，在N2保护下向反应瓶中加入质量浓度为25％的10mL氨水，快速搅拌反应，用HCl调节溶液pH至碱性，反应10min后加入10mL柠檬酸三钠溶液，将反应瓶放置于80℃的水浴锅中继续搅拌反应30min，产物经离心，洗涤和干燥处理得到Fe3O4，在4℃避光条件下储存，或分散在溶液中制备Fe3O4的分散液用于后续实验；(3)磁性分子印迹核/壳聚合物的制备：取2mL B‑CDs水分散液加入到18mL含有0.8mL Fe3O4的水分散液中，搅拌反应30min后，加入模板分子藻红蛋白和20μL 3‑氨基丙基三乙氧基硅烷，继续反应1h，再加入40μL氨水和40μL硅酸四乙酯，在避光处反应12h，将产物离心，用乙醇/乙腈(体积比为8:2)洗涤三次，除去模板分子，产物经离心，洗涤和干燥处理得到Fe3O4/B‑CDs/SiO2‑MIPs，将此磁性分子印迹核/壳聚合物分散在溶液中制备分散液备用；(4)在室温和磁力搅拌下，向聚合物分散液中加入一定量的藻红蛋白形成均质混合液，在避光处孵化5min后，测定不同藻红蛋白浓度下均质混合液的荧光发射光谱，拟合藻红蛋白与B‑CDs的荧光发射峰强度比率(I藻红蛋白/IB‑CDs)与藻红蛋白摩尔浓度之间的线性关系，构建藻红蛋白比率荧光传感器。