[发明专利]一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)氨基化蓝荧光发射B-CDs的制备：取0.3mL乙二醚和25mL儿茶酚溶液超声混匀，转入50mL聚四氟乙烯内胆的高压反应釜中，在180℃下加热反应12h，将制得的深棕色混合液用20mL二次蒸馏水稀释，以12000rpm转速离心除去较大颗粒，收集上清液并采用0.4μm微滤膜过滤，滤液采用截留分子量1000 Da透析袋透析处理以清除未反应实验原料，将透析袋中溶液倒出，采用旋转蒸发除去90％的液体，再真空干燥得到B-CDs，在4℃避光条件下储存，或分散在溶液中制备B-CDs的分散液用于后续实验；

(2)羧基化Fe₃O₄磁性纳米粒的制备：向250mL反应瓶中加入摩尔比为2:1的氯化铁和氯化亚铁配成100mL混合溶液，在N₂保护下向反应瓶中加入质量浓度为25％的10mL氨水，快速搅拌反应，用HCl调节溶液pH值，但此溶液pH仍为碱性，反应10min后加入10mL柠檬酸三钠溶液，将反应瓶放置于80℃的水浴锅中继续搅拌反应30min，产物经离心，洗涤和干燥处理得到Fe₃O₄，在4℃避光条件下储存，或分散在溶液中制备Fe₃O₄的分散液用于后续实验；

(3)磁性分子印迹核/壳聚合物的制备：取2mL B-CDs水分散液加入到18mL含有0.8mLFe₃O₄的水分散液中，搅拌反应30min后，加入模板分子藻红蛋白和20μL3-氨基丙基三乙氧基硅烷，继续反应1h，再加入40μL氨水和40μL硅酸四乙酯，在避光处反应12h，将产物离心，用体积比为8:2的乙醇/乙腈混合溶剂洗涤三次，除去模板分子，产物经离心，洗涤和干燥处理得到Fe₃O₄/B-CDs/SiO₂-MIPs，将此磁性分子印迹核/壳聚合物分散在溶液中制备分散液备用；

(4)在室温和磁力搅拌下，向聚合物分散液中加入一定量的藻红蛋白形成均质混合液，在避光处孵化5min后，测定不同藻红蛋白浓度下均质混合液的荧光发射光谱，拟合藻红蛋白与B-CDs的荧光发射峰强度比率(I_藻红蛋白/I_B-CDs)与藻红蛋白摩尔浓度之间的线性关系，构建藻红蛋白比率荧光传感器。

2.根据权利要求1所述的一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法,其特征在于，步骤(1)中所述的氨基化蓝荧光发射B-CDs，其尺寸为1～5nm。

3.根据权利要求1所述的一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法,其特征在于，步骤(2)中所述的羧基化Fe₃O₄磁性纳米粒，其尺寸为10～30nm。

4.根据权利要求1所述的一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法,其特征在于，步骤(3)中所述的B-CDs质量浓度为1～10mg mL^-1；Fe₃O₄磁性纳米粒质量浓度为5～20mg mL^-1；藻红蛋白的用量为0.5～1μM。

5.根据权利要求1所述的一种基于磁性分子印迹核/壳聚合物的藻红蛋白比率荧光传感器的制备方法,其特征在于，步骤(4)中所述的藻红蛋白摩尔浓度的线性检测范围为1～500nM，检测极限为1～10纳摩尔/升。