[发明专利]一种多重RT-PCR检测试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种多重RT‑PCR检测试剂盒及其在同时检测诺如病毒GI型、诺如病毒GII型和大肠杆菌噬菌体MS2中的应用。试剂盒含质控病毒MS2和三种质控模板(含NoV GI、NoV GII和MS2特异性核苷酸序列的质粒)。检测体系含诺如病毒GI型、诺如病毒GII型和大肠杆菌噬菌体MS2各自的正向引物、反向引物和特异性探针。本发明的多重检测体系及其试剂盒与传统方法相比不需要采用常规单一检测，可在同一反应体系内直接对检测样品中混合病毒进行同步检测和分析，检测信号干扰性小，灵敏度高，第一时间为医院食源性疾病监测及食品样品提供全面、精确、高效的诺如病毒检测结果及参考。

主权项

1.一种多重RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：(1)RNA提取试剂，以大肠杆菌噬菌体MS2为RNA提取质控；(2)PCR反应体系：含诺如病毒GI型、诺如病毒GII型和大肠杆菌噬菌体MS2各自的正向引物、反向引物和特异性探针；诺如病毒GI型引物、特异性探针：正向引物GI‑F：5’‑GGCAGATGATGAGCGTGAGG‑3’反向引物GI‑R：5’‑AGAAACCCCATCCAGACCCAAACT‑3’特异性探针Probe‑P:5’‑HEX‑CACTTTATGGAGCAGAGTGAC‑BHQ‑3’；诺如病毒GII型引物、特异性探针：正向引物GII‑F：5’‑CTAGAAACGCTCCAGGTGAAAT‑3’反向引物GII‑R：5’‑TCTGGCCAAATGGGAAAGGTAA‑3’特异性探针Probe‑P:5’‑FAM‑CCCTTGGGCCCTGATTTGA‑TAMRAR‑3’；大肠杆菌噬菌体MS2引物、特异性探针：正向引物MS‑F：5’‑ATTCCGACTGCGAGCTTATTGTT‑3’反向引物MS‑R：5’‑GGAGTTTGCTGCGATTGCTGAGG‑3’特异性探针Probe‑P:5’‑ROX‑AATCGGGTTTCCATCTTTTAG‑BHQ2‑3’；(3)PCR质控反应体系：以含SEQ ID NO.10所示核苷酸序列的质粒pcDA‑NoV‑GI、含SEQ ID NO.11所示核苷酸序列的质粒pcDA‑NoV‑GII及含SEQ ID NO.12所示核苷酸序列的质粒pcDA‑MS2的混合质粒作为PCR质控反应模板；SEQ ID NO.10所示核苷酸序列：5’‑ggcagatgatgagcgtgaggtggattacaatgagaagatcagttttgaggcgccccccactttatggagcagagtgacaaagtttgggtctggatggggtttct‑3’；SEQ ID NO.11所示核苷酸序列：5’‑ctagaaacgctccaggtgaaatactatggagcgcgcccttgggccctgatttgaatccttacctttcccatttggccaga‑3’；SEQ ID NO.12所示核苷酸序列：5’‑attccgactgcgagcttattgttaaggcaatgcaaggtctcctaaaagatggaaacccgattccctcagcaatcgcagcaaactcc‑3’。