[发明专利]一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法在审

专利信息
申请号: 201811299140.8 申请日: 2018-10-22
公开(公告)号: CN109288911A 公开(公告)日: 2019-02-01
发明(设计)人: 郝慧琴;李振;关建红;王泽;高玉亭 申请(专利权)人: 山西中医药大学
主分类号: A61K36/756 分类号: A61K36/756;A61P19/02;A61P29/00;A61P37/04;G01N33/50
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 030619 山*** 国省代码: 山西;14
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摘要: 发明公开了一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法,试验材料包括80只SD大鼠、生理盐水、三种剂量的二妙散水煎剂、甲氨蝶呤,80只SD大鼠灌胃生理盐水,灌胃三种剂量的二妙散水煎剂,灌胃甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周),为阳性对照组,每次灌胃1mL/100g,连续灌胃15天,取血,杀检,建立CIA大鼠模型,观察脾脏系数改变、关节滑膜切片病理改变;检测血清IL‑6、TNF‑α水平的变化、吞噬细胞及IL‑6、TNF‑α水平的变化、及胆碱抗炎通路关键受体α7nAChR的表达等指标探讨RA治疗机理。本发明结果显示二妙散组关节腔滑膜组织成绒毛状,伸向关节腔内,炎性细胞较少,二妙散对CHRNA7具有调控作用,为探究二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制提供科学依据。
搜索关键词: 灌胃 类风湿关节炎 甲氨蝶呤 生理盐水 因子表达 关节腔 煎剂 散水 阳性对照组 大鼠模型 调控作用 关节滑膜 滑膜组织 脾脏系数 试验材料 吞噬细胞 炎性细胞 药理机制 指标探讨 绒毛状 血清 切片 试验 胆碱 抗炎 取血 治疗 病理 检测 观察
【主权项】:
1.一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法,其特征在于,试验材料包括80只SD大鼠、生理盐水、三种剂量的二妙散水煎剂、甲氨蝶呤,试验方法包括如下步骤:S1:试验动物的处理选择80只SD大鼠,将所有CIA模型大鼠随机分为6组,每组12‑15只;灌胃生理盐水,为正常对照组和模型对照组,灌胃三种剂量的二妙散水煎剂,灌胃甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周),为阳性对照组,每次灌胃1mL/100g,连续灌胃15天,禁食,麻醉,杀检,腹主动脉取血,同时将脾脏、关节取材备用;S2:建立CIA大鼠模型;S3:脾脏系数指标检测按照编号将大鼠体重与脾脏称重记录,通过计算公式脾脏系数=脾脏重/体重得出结果,应用SPSS 20.0软件分析结果;S4:血清中IL‑6和TNF‑α水平检测检测血流变、血细胞检测及血浆中肿瘤坏死因子、白介素6水平的变化,依照试剂盒操作程序进行检测;S5:关节滑膜切片病理检测观察大鼠关节取材,EDTA脱钙,脱钙完成后纵向剖开踝关节,石蜡包埋,切片,HE染色,观测各组炎症的变化;S6:吞噬细胞中IL‑6、IL‑37、TNF‑α、CHRNA7 mRNA的表达检测水平检测;提取大鼠成纤维样滑膜细胞总RNA,测定总RNA浓度,在PCR仪中反转录为cDNA,以cDNA为模板,在RT‑PCR仪中与α7nAChR引物进行扩增,得到CT值,以GAPDH作参照,二妙散含药组成分组与空白组之间进行比较,得到2‑ΔΔCT即为关节滑膜腔中α7nAChR的mRNA变化;S7:数据分析通过SPSS 20.0软件分析,数据以均值xs表示,组间比较采用ANOVA分析和LSD‑t检验,P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著。
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