[发明专利]一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法

说明书

本发明公开了一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法，试验材料包括80只SD大鼠、生理盐水、三种剂量的二妙散水煎剂、甲氨蝶呤，80只SD大鼠灌胃生理盐水，灌胃三种剂量的二妙散水煎剂，灌胃甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周)，为阳性对照组，每次灌胃1mL/100g，连续灌胃15天，取血，杀检，建立CIA大鼠模型，观察脾脏系数改变、关节滑膜切片病理改变；检测血清IL‑6、TNF‑α水平的变化、吞噬细胞及IL‑6、TNF‑α水平的变化、及胆碱抗炎通路关键受体α7nAChR的表达等指标探讨RA治疗机理。本发明结果显示二妙散组关节腔滑膜组织成绒毛状，伸向关节腔内，炎性细胞较少，二妙散对CHRNA7具有调控作用，为探究二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制提供科学依据。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，特别涉及一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法。

背景技术

二妙散源自《丹溪心法》，由苍术和黄柏等比配伍而成，黄柏苦寒清热，苍术苦温燥湿，为祛湿剂，是中医治疗RA的经典基本方。目前文献报道二妙散的研究主要集中在单味药的含量测定及药效，以及二妙散方剂对关节组织和血清炎症因子的作用。Chen等证实二妙散有免疫抑制作用，其中黄柏为主要抑制药，而小檗碱为其主要免疫抑制成分，对免疫系统的多个环节均有较强的免疫抑制作用。用弗氏完全佐剂诱导的大鼠关节炎模型，发现二妙散和灵芝制剂在关节炎大鼠膝盖中具有止痛和抗炎作用，但没有进一步研究二妙散的抗炎作用机制。研究人员将二妙散作用于迟发型肝损伤小鼠超敏反应诱导期，结果显示抗血清转氨酶水平显著升高、组织病理学特性改变，表明二妙散具有免疫调节功能。

高度细胞类型依赖性α7烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChRs)表达在异源表达系统中。α7nAChR失衡可能参与不同的疾病，如精神分裂症、阿尔茨海默病，以及炎症和免疫功能的调节高度相关。有报道显示，巨噬细胞等诸多免疫细胞上均表达α7nAChR，并通过基因敲除小鼠实验证实了α7nAChR在胆碱能抗炎通路中处于核心地位。α7nAChR是调节细胞信号传导的重要因子，其在许多不同的非神经元细胞如血管和脑内皮细胞、支气管上皮细胞、角质形成细胞、星形胶质细胞、滑膜细胞、胸腺细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞均有不同程度的表达。小胶质细胞上的α7nAChR激活也可抑制促炎因子如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)的产生。

CHRNA7是编码α7nAChR蛋白(uniprot ID P36544)的关键基因，是配体门控离子通道超家族的成员，其促进突触处的快速信号传递，其异五聚体由同源亚基组成。CHRNA7编码的蛋白质形成同源寡聚体通道，对钙离子具有显著渗透性。研究表明，CHRNA7基因主要表达在小鼠杏仁核后部杏仁核和CA3区域，以及人类乳头体中。CHRNA7与CHRNA基因家族与参与神经疾病的JAK2、AKT1和PICK1存在基因互作，表明CHRNA7在神经元发育阶段的细胞中受神经疾病调节。

现有的对于类风湿关节炎的治疗，还在研究实验阶段，目前没有较好实验方法证明二妙散对于减少炎症因子和增加抑炎因子的表达有作用。缺乏二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制的科学依据。

发明内容

发明的目的在于提供一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法，本发明为探究二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制提供科学依据，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种二妙散对类风湿关节炎抑炎因子表达试验方法，试验材料包括80只SD大鼠、生理盐水、三种剂量的二妙散水煎剂、甲氨蝶呤，试验方法包括如下步骤：

S1：试验动物的处理