[发明专利]一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法

摘要

本发明公开了一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其包括，10种赤霉素的提取：农作物叶片研磨，加入提取试剂，超声、涡旋提取；样品的纯化；检测分析：使用超高效液相色谱‑串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量。本发明通过调整前处理中将含0.1％甲酸的70％乙睛作为提取试剂、选择常温超声5min+涡旋5min的方法进行提取、选择MAX和C18(CNW LC‑C18 200mg)按照质量比1：(2～4)作为纯化材料，并采用17个混标作为通用质控品监控仪器状态、2‑氯苯丙氨酸作为内标监控样品采集情况，大大提高了本发明赤霉素的检测稳定性，检测重复好，误差小。

主权项

1.一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其特征在于：包括，10种赤霉素的提取：将新鲜农作物叶片200 mg经液氮研磨，加入含0.1 %甲酸的70%乙腈的提取试剂1.5 mL，进行常温超声5 min，涡旋5min提取，使用14000 rpm转速离心分离，取上清液1.0 mL于冷冻干燥离心机挥干溶剂，再使用70%乙腈100 μL溶解样本，加入纯水稀释至有机溶剂乙腈含量10%进行样品的纯化；样品的纯化：使用MAX和C18柱按照质量比1：（2~4）进行除杂和富集；所述C18柱，其规格为CNW LC‑C18 200mg；检测分析：使用超高效液相色谱‑串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量；质谱的离子对信息设置为：GA1‑2：Q1：347、Q3：259、保留时间3.92、DP‑60、CE‑22；GA1‑4：Q1：347、Q3：241、保留时间3.92、DP‑60、CE‑25；GA3‑1：Q1：345、Q3：143、保留时间3.88、DP‑60、CE‑32；GA3‑3：Q1：345、Q3：239、保留时间3.88、DP‑60、CE‑19；GA4‑1：Q1：331、Q3：212.8、保留时间6.27、DP‑60、CE‑41；GA4‑2：Q1：331、Q3：257、保留时间6.27、DP‑60、CE‑30；GA7‑2：Q1：329.2、Q3：211、保留时间6.17、DP‑70、CE‑34；GA7‑3：Q1：329.2、Q3：223、保留时间6.17、DP‑60、CE‑24；GA9‑1：Q1：315.1、Q3：270.9、保留时间7.38、DP‑80、CE‑30；GA9‑2：Q1：315.1、Q3：253.3、保留时间7.38、DP‑80、CE‑32；GA15‑1：Q1：329.1、Q3：257.1、保留时间7.36、DP‑75、CE‑34；GA15‑4：Q1：329.1、Q3：131、保留时间7.36、DP‑75、CE‑40；GA19‑2：Q1：361.2、Q3：273.2、保留时间4.9、DP‑80、CE‑37；GA19‑6：Q1：361.2、Q3：317.1、保留时间4.9、DP‑80、CE‑32；GA20‑1：Q1：331.3、Q3：287、保留时间5.11、DP‑60、CE‑29；GA20‑3：Q1：331.3、Q3：243、保留时间5.11、DP‑58、CE‑28；GA24‑1：Q1：345.1、Q3：257.1、保留时间6.54、DP‑73、CE‑35；GA24‑5：Q1：345.1、Q3：301.1、保留时间6.54、DP‑60、CE‑30；GA53‑2：Q1：347.1、Q3：188.9、保留时间5.73、DP‑70、CE‑45；GA53‑5：Q1：347.1、Q3：303.1、保留时间5.73、DP‑70、CE‑36；还包括，使用4,4’‑亚甲基双（2‑氯苯胺）、对茴香胺、L‑酪氨酸甲酯、3‑氯苯胺、2，4‑二甲基喹啉、磺胺吡啶、阿特拉津、磺胺多辛、DL‑亮氨酸、N‑苯甲酰基‑L‑酪氨酸乙酯、6‑苯基‑2‑硫脲嘧啶、N‑(邻甲苯酰)甘氨酸、2‑甲基‑5‑硝基咪唑‑1‑乙醇、甘草次酸、黄烷酮、ε‑己内酯、2‑氨基吡啶的混合标样作为通用质控品，每次检测至少进两针通用质控品，根据谱图重叠情况分析检测仪器的状态；所述4,4’‑亚甲基双（2‑氯苯胺）：对茴香胺：L‑酪氨酸甲酯：3‑氯苯胺：2，4‑二甲基喹啉：磺胺吡啶：阿特拉津：磺胺多辛：DL‑亮氨酸：N‑苯甲酰基‑L‑酪氨酸乙酯：6‑苯基‑2‑硫脲嘧啶：N‑(邻甲苯酰)甘氨酸：2‑甲基‑5‑硝基咪唑‑1‑乙醇：甘草次酸：黄烷酮：ε‑己内酯：2‑氨基吡啶=1：0.5：0.5：2：1：0.4：0.1：0.1：0.2：0.5：0.5：1：1：0.1：0.5：2：0.2。