[发明专利]一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法

权利要求书

1.一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其特征在于：包括，

10种赤霉素的提取：将新鲜农作物叶片200 mg经液氮研磨，加入含0.1 %甲酸的70%乙腈的提取试剂1.5 mL，进行常温超声5 min，涡旋5min提取，使用14000 rpm转速离心分离，取上清液1.0 mL于冷冻干燥离心机挥干溶剂，再使用70%乙腈100 μL溶解样本，加入纯水稀释至有机溶剂乙腈含量10%进行样品的纯化；

样品的纯化：使用MAX和C18柱按照质量比1：（2~4）进行除杂和富集；所述C18柱，其规格为CNW LC-C18 200mg；

检测分析：使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量；

质谱的离子对信息设置为：GA1-2：Q1：347、Q3：259、保留时间3.92、DP-60、CE-22；GA1-4：Q1：347、Q3：241、保留时间3.92、DP-60、CE-25；GA3-1：Q1：345、Q3：143、保留时间3.88、DP-60、CE-32；GA3-3：Q1：345、Q3：239、保留时间3.88、DP-60、CE-19；GA4-1：Q1：331、Q3：212.8、保留时间6.27、DP-60、CE-41；GA4-2：Q1：331、Q3：257、保留时间6.27、DP-60、CE-30；GA7-2：Q1：329.2、Q3：211、保留时间6.17、DP-70、CE-34；GA7-3：Q1：329.2、Q3：223、保留时间6.17、DP-60、CE-24；GA9-1：Q1：315.1、Q3：270.9、保留时间7.38、DP-80、CE-30；GA9-2：Q1：315.1、Q3：253.3、保留时间7.38、DP-80、CE-32；GA15-1：Q1：329.1、Q3：257.1、保留时间7.36、DP-75、CE-34；GA15-4：Q1：329.1、Q3：131、保留时间7.36、DP-75、CE-40；GA19-2：Q1：361.2、Q3：273.2、保留时间4.9、DP-80、CE-37；GA19-6：Q1：361.2、Q3：317.1、保留时间4.9、DP-80、CE-32；GA20-1：Q1：331.3、Q3：287、保留时间5.11、DP-60、CE-29；GA20-3：Q1：331.3、Q3：243、保留时间5.11、DP-58、CE-28；GA24-1：Q1：345.1、Q3：257.1、保留时间6.54、DP-73、CE-35；GA24-5：Q1：345.1、Q3：301.1、保留时间6.54、DP-60、CE-30；GA53-2：Q1：347.1、Q3：188.9、保留时间5.73、DP-70、CE-45；GA53-5：Q1：347.1、Q3：303.1、保留时间5.73、DP-70、CE-36；

还包括，使用4,4’-亚甲基双（2-氯苯胺）、对茴香胺、L-酪氨酸甲酯、3-氯苯胺、2，4-二甲基喹啉、磺胺吡啶、阿特拉津、磺胺多辛、DL-亮氨酸、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯、6-苯基-2-硫脲嘧啶、N-(邻甲苯酰)甘氨酸、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇、甘草次酸、黄烷酮、ε-己内酯、2-氨基吡啶的混合标样作为通用质控品，每次检测至少进两针通用质控品，根据谱图重叠情况分析检测仪器的状态；所述4,4’-亚甲基双（2-氯苯胺）：对茴香胺：L-酪氨酸甲酯：3-氯苯胺：2，4-二甲基喹啉：磺胺吡啶：阿特拉津：磺胺多辛：DL-亮氨酸：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯：6-苯基-2-硫脲嘧啶：N-(邻甲苯酰)甘氨酸：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇：甘草次酸：黄烷酮：ε-己内酯：2-氨基吡啶=1：0.5：0.5：2：1：0.4：0.1：0.1：0.2：0.5：0.5：1：1：0.1：0.5：2：0.2。

2.如权利要求1所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其特征在于：所述检测分析，包括使用70%的乙腈作为洗脱剂，使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量。

3.如权利要求1或2所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其特征在于：还包括，将2-氯苯丙氨酸代替溶剂作为内标，在检测过程中，通过2-氯苯丙氨酸峰面积和保留时间反映实际样本的采集情况；所述2-氯苯丙氨酸浓度为1 μg/mL。

4.如权利要求1所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其特征在于：所述4,4’-亚甲基双（2-氯苯胺）的浓度为1μg/mL、对茴香胺的浓度为0.5μg/mL、L-酪氨酸甲酯的浓度为0.5μg/mL、3-氯苯胺的浓度为2μg/mL、2，4-二甲基喹啉的浓度为1μg/mL、磺胺吡啶的浓度为0.4μg/mL、阿特拉津的浓度为0.1μg/mL、磺胺多辛的浓度为0.1μg/mL、DL-亮氨酸的浓度为0.2μg/mL、N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯的浓度为0.5μg/mL、6-苯基-2-硫脲嘧啶的浓度为0.5μg/mL、N-(邻甲苯酰)甘氨酸的浓度为1μg/mL、2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇的浓度为1μg/mL、甘草次酸的浓度为0.1μg/mL、黄烷酮的浓度为0.5μg/mL、ε-己内酯的浓度为2μg/mL、2-氨基吡啶的浓度为0.2μg/mL。