[发明专利]一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法

说明书

本发明公开了一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其包括，10种赤霉素的提取：农作物叶片研磨，加入提取试剂，超声、涡旋提取；样品的纯化；检测分析：使用超高效液相色谱‑串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量。本发明通过调整前处理中将含0.1％甲酸的70％乙睛作为提取试剂、选择常温超声5min+涡旋5min的方法进行提取、选择MAX和C18(CNW LC‑C18 200mg)按照质量比1：(2～4)作为纯化材料，并采用17个混标作为通用质控品监控仪器状态、2‑氯苯丙氨酸作为内标监控样品采集情况，大大提高了本发明赤霉素的检测稳定性，检测重复好，误差小。

技术领域

本发明属于痕量植物激素的检测技术领域，具体涉及一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法。

背景技术

赤霉素(Gibberellins)是一类属于双萜类化合物的植物生长调节剂，在种子萌发、幼苗生长、开花结果等方面具有多种生理功能，已被广泛使用在瓜果、蔬菜、粮食作物、园艺等生产过程中。

由于赤霉素在植物中的含量较低，对其进行定量要求较高的前处理和检测方法，目前的检测方法主要有荧光光谱法，酶联免疫法，气相色谱法等，目前的检测方法有些前处理过于繁琐，有些前处理灵敏度较低，有些前处理会造成对仪器的污染，检测目前的检测方法大多重复性差，检测结果容易受到操作、仪器波动等影响，使得两次重复检测的定量结果差异较大。因此如何提供一种能够降低对仪器的污染、简化繁琐的操作步骤带来的误差、增强检测的稳定性、缩短操作时间，是本领域有待解决的技术问题。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法，其包括，

10种赤霉素的提取：农作物叶片研磨，加入提取试剂，超声、涡旋提取；

样品的纯化：使用MAX和C18(CNW LC-C18200mg)进行除杂和富集；

检测分析：使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量。

作为本发明所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法的一种优选方案：所述10种赤霉素的提取，包括，将新鲜农作物叶片200mg经液氮研磨，然后加入含0.1％甲酸的70％乙睛的提取试剂1.5mL，进行常温超声5min，涡旋5min提取，提取结束后使用14000rpm转速离心分离，取上清液1.0mL使用冷冻干燥离心机挥干溶剂，再使用70％乙睛100uL溶解样本，再加入纯水700uL稀释至有机溶剂乙腈含量10％进行样品的纯化。

作为本发明所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法的一种优选方案：所述样品的纯化，包括使用MAX和C18(CNW LC-C18200mg)按照质量比1：(2～4)进行除杂和富集。

作为本发明所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法的一种优选方案：所述检测分析，包括使用70％的乙睛作为洗脱剂，使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，计算待测赤霉素的含量。

作为本发明所述的提高同时检测10种赤霉素检测稳定性的方法的一种优选方案：还包括，将2-氯苯丙氨酸代替溶剂作为内标，在检测过程中，通过2-氯苯丙氨酸峰面积和保留时间反映实际样本的采集情况；所述2-氯苯丙氨酸浓度为1μg/mL。