[发明专利]一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法

摘要

本发明公开了一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法，该方法是以霍山米斛鲜条的酸性乙醇粗提液为起始原料，进行酸碱调节‑液液萃取后获得生物碱粗提物，结合液相色谱、气质联用、液质联用初步分析米斛总生物碱可能组成；其后采用固相萃取柱分离获得特征生物碱组分，借助液质联用技术确认其生物碱组成。本发明对鲜霍山米斛中生物碱组成进行分析检测，共鉴定出已知结构生物碱11种，另有三种未知结构的倍半萜类生物碱，这为霍山米斛特征性生物碱类物质研究提供了一种方法，并为其组效关系研究奠定了理论基础。

主权项

1.一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将霍山米斛鲜条洗净并沥去表面水分，切成长度1cm米斛段，置于真空冷冻干燥机中进行冻干处理，冻干后粉碎至90‑110目；（2）将冻干米斛粉，加入20‑40倍质量提取溶剂，75‑85℃加热提取3‑5次，合并提取液，减压浓缩至原体积1/3‑1/5，得到米斛粗提液；（3）将上述粗提液加盐酸调pH为0.5‑4，二氯甲烷提取2‑3次脱脂，脱脂后提取液加氨水调pH 9‑10，氯仿反复萃取3‑5次，合并氯仿提取液，经水洗、减压浓缩后得霍山米斛生物碱粗提物，分别进行液相色谱、气质联用、液质联用初步分析生物碱组成；(4）将步骤（3）所得霍山米斛生物碱粗提物，2% H3PO4溶液溶解、过滤上样，过PCX固相萃取柱，依次以甲醇/乙腈溶液及不同浓度的含碱溶液洗脱，分别收集洗脱液，经脱盐处理，浓缩干燥得到霍山米斛特征生物碱组分，再次进行液质联用分析确认。