[发明专利]一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法

说明书

本发明公开了一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法，该方法是以霍山米斛鲜条的酸性乙醇粗提液为起始原料，进行酸碱调节‑液液萃取后获得生物碱粗提物，结合液相色谱、气质联用、液质联用初步分析米斛总生物碱可能组成；其后采用固相萃取柱分离获得特征生物碱组分，借助液质联用技术确认其生物碱组成。本发明对鲜霍山米斛中生物碱组成进行分析检测，共鉴定出已知结构生物碱11种，另有三种未知结构的倍半萜类生物碱，这为霍山米斛特征性生物碱类物质研究提供了一种方法，并为其组效关系研究奠定了理论基础。

技术领域

本发明涉及中药材组份分析技术领域，尤其涉及一种鲜霍山米斛中特征生物碱组成的分析方法。

背景技术

石斛具有益胃生津，滋阴清热等功效，《中国药典》2010版、2015版均有所收载。现代药理学研究表明，石斛具有增强免疫、抗疲劳、抗氧化、预防辐射型损伤等多种作用，其主要活性成分为多糖、生物碱及挥发性成分等。石斛自古以来，讲究“鲜品为上”，著名方剂如“三鲜汤”、“叶氏养胃汤”等，均以鲜石斛入方。近代鲜药研究专家郝近大教授也发现：鲜干石斛的主要活性成分含量存在明显差别，如：还原糖含量鲜品(16.20％)＞干品(5.129％)；总生物碱含量鲜品(1.226％)＞干品(0.65％)，这也从物质基础方面证实鲜石斛的药用物质普遍高于干石斛2-3倍。近年来，随着人工培植石斛技术日臻完善与成熟，石斛鲜品供应和销售规模扩大，除供中医临床使用外，自制鲜汁也备受消费者青睐。

霍山石斛(学名：Dendrobium huoshanense)主产于大别山区的安徽省霍山县，是药用石斛中的极品。霍山石斛中最名贵的就是霍山米斛，其生长周期长，对生长环境要求苛刻，被国家列为二级濒危保护植物，也是国家地理标志保护品种，加之加工工艺复杂、生长过程缓慢，所以价格也是最贵的。2013年霍山当地物价部门规定霍山所产三种石斛的指导价格：霍山米斛480元/克，霍山铁皮石斛68元/克，霍山铜皮石斛45元/克。截至2018年3月，霍山米斛特级品龙头凤尾的零售价格仍然在200-300元/克。鉴于霍山米斛价格普遍高于铁皮或铜皮石斛7-11倍，对霍山米斛中药用物质组成解析对于阐述种属特异性及其组效关系具有重大意义。

对不同种属石斛的指纹图谱研究主要集中在液相特征图谱和红外光谱，如：魏刚等比较鲜铁皮石斛茎、叶不同部位高效液相色谱(HPLC)特征图谱的差异，分别标示出33、17个特征共有峰，同批次茎、叶有类似成分，且有较高相似度；(鲜铁皮石斛茎、叶高效液相色谱特征图谱比较[J].广州中医药大学学报,2012，29(5)：561-565.)；并从霍山米斛HPLC特征图谱中标示出24个黄酮类特征共有峰，10批样品的相似度较高(0.918-0.990)(霍山石斛HPLC特征图谱研究[J].中成药，2014，36(12)：2642-2644.)；孟海涛建立了霍山产霍山石斛、铁皮石斛、铜皮石斛的HPLC指纹图谱体系，指认了三种石斛的柚皮素、毛兰素和总酚含量在1-12月份及茎、叶、花之间的变化情况(安徽霍山产三种石斛HPLC化学指纹研究[D].合肥工业大学，2015.)；刘文杰对霍山石斛和铁皮石斛的红外光谱解析发现：两者指纹特征区主要在1000-700cm^-1具有显著差别(铁皮石斛的红外光谱定性定量研究[D].北京中医药大学，2014.)。