[发明专利]一种单细胞甲基化测序技术及其应用

摘要

本发明公开了一种单细胞甲基化测序技术及其应用。本发明具有如下优点：(1)操作简单，手工操作时间短，不易污染。(2)针对重硫酸盐处理后基因组序列特点，设计预扩增引物。预扩增引物3’端为H碱基。H碱基不与C互补结合，不影响预扩增引物与重亚硫酸盐转化后的序列结合，但可降低随机引物和接头序列结合的几率；(3)具有更高的Mapping率，有效的提高了测序数据的使用率，比目前的scRRBS(平均25％)和scBS(平均10‑30％)左右，提高20％‑30％。本发明对于单细胞DNA甲基化研究具有重要意义。

主权项

1.一种单细胞甲基化测序文库的构建方法，包括如下步骤：(1)将单细胞裂解并进行重亚硫酸盐转化；(2)以步骤(1)处理得到的DNA样本为模板，利用BstDNA聚合酶和引物甲进行第一链的合成；所述引物甲包括测序接头甲和随机引物甲；所述随机引物甲包括5‑9个N和1‑2个H；所述碱基H位于引物甲的3’末端；(3)以步骤(2)的产物为模板，利用引物乙进行第二链的合成；所述引物乙包括测序接头乙和随机引物乙；所述随机引物乙包括5‑9个N和0‑2个H；所述碱基H位于引物乙的3’末端；(4)对步骤(3)的产物进行PCR扩增，得到测序文库；PCR扩增时向样本引入index标签；所述测序接头甲和测序接头乙为根据不同测序平台选择对应的测序接头。