[发明专利]一种单细胞甲基化测序技术及其应用

权利要求书

1.一种单细胞甲基化测序文库的构建方法，包括如下步骤：

（1）将单细胞裂解并进行重亚硫酸盐转化；

（2）以步骤（1）处理得到的DNA样本为模板，利用BstDNA聚合酶和引物甲进行第一链的合成；所述引物甲包括测序接头甲和随机引物甲；所述随机引物甲包括5-9个N和1-2个H；所述碱基H位于引物甲的3’末端；所述第一链合成的反应程序为：65℃3min；65℃2min、8℃4min、16℃1min、22℃1min、28℃1min、36℃1min、36.5℃1min、37℃8min，5-10个循环；4℃hold；

（3）以步骤（2）的产物为模板，利用引物乙进行第二链的合成；所述引物乙包括测序接头乙和随机引物乙；所述随机引物乙包括5-9个N和0-2个H；所述碱基H位于引物乙的3’末端；

（4）对步骤（3）的产物进行PCR扩增，得到测序文库；PCR扩增时向样本引入index标签；

所述引物甲为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物乙为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

所述测序平台为illumina测序平台；

所述测序接头甲为P5测序接头；

所述测序接头乙为P7测序接头。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述BstDNA聚合酶为Bst DNA聚合酶大片段、Bst2.0 DNA聚合酶或Bst3.0 DNA聚合酶。

3.权利要求1或2所述的方法制备得到的单细胞甲基化测序文库。

4.一种用于构建单细胞甲基化测序文库的试剂盒，包括权利要求1或2中所述的BstDNA聚合酶、引物甲和引物乙。

5.单细胞甲基化测序方法，包括如下步骤：利用权利要求1或2所述方法构建单细胞甲基化测序文库，然后对所述单细胞甲基化测序文库进行测序；所述方法为非疾病诊断和治疗目的的方法。

6.权利要求1或2所述方法在单细胞DNA甲基化研究中的应用；所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用。

7.权利要求3所述的单细胞甲基化测序文库或权利要求4所述的试剂盒在单细胞DNA甲基化研究中的应用；所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用。

8.权利要求5所述的单细胞甲基化测序方法在单细胞DNA甲基化研究中的应用；所述应用为非疾病诊断和治疗目的的应用。