[发明专利]过表达miR-125a-5p慢性病毒载体构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201811096391.6 | 申请日： | 2018-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN109295101A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 周建国;马虎;吕水萍;张钰;王菲;王怡;刘大海;宋林霞 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 刘楠;李余江 |
| 地址： | 563003 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了过表达miR‑125a‑5p慢性病毒载体构建方法及其应用，构建方法是依据GenBank中has‑miR‑125a‑5p序列，从miRBase中获得成熟的hsa‑miR‑125a和前体序列hsa‑pre‑miR‑125a；依据has‑miR‑125的序列及慢病毒载体GV369，引入酶切位点AgeI/NheI，调取根据miRNA过表达载体设计原则，设计引物序列，通过PCR调取目的片段；PCR扩增miR‑125a后，经电泳鉴定，酶切，PCR产物与载体进行交换，转化；获取含有miR‑125a片段的慢病毒载体GV369‑miR‑125a。其主要是在制备改善厄洛替尼耐药性药物的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 慢病毒载体 慢性病毒 载体构建 调取 应用 设计引物序列 表达载体 电泳鉴定 厄洛替尼 酶切位点 目的片段 前体序列 设计原则 耐药性 构建 酶切 制备 引入 成熟 转化 交换 | ||
【主权项】：
1.一种过表达miR‑125a‑5p慢性病毒载体的构建方法，其特征在于：依据GenBank中has‑miR‑125a‑5p序列，从miRBase中获得成熟的hsa‑miR‑125a和前体序列hsa‑pre‑miR‑125a；依据has‑miR‑125的序列及慢病毒载体GV369，引入酶切位点AgeI/NheI，调取根据miRNA过表达载体设计原则，设计引物序列，通过PCR调取目的片段；引物序列如下：hsa‑mir‑125a(9378‑2)‑P1：GAGGATCCCCGGGTACCGGTGGTCTTTCTGTCTCTGGC；hsa‑mir‑125a(9378‑2)‑P2：CACACATTCCACAGGCTAGTCAGTTGGTGGTCAAATG；PCR扩增miR‑125a后，经电泳鉴定，酶切，PCR产物与载体进行交换，转化；获取含有miR‑125a片段的慢病毒载体GV369‑miR‑125a。
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