[发明专利]过表达miR-125a-5p慢性病毒载体构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201811096391.6 | 申请日： | 2018-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN109295101A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 周建国;马虎;吕水萍;张钰;王菲;王怡;刘大海;宋林霞 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 刘楠;李余江 |
| 地址： | 563003 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 慢病毒载体 慢性病毒 载体构建 调取 应用 设计引物序列 表达载体 电泳鉴定 厄洛替尼 酶切位点 目的片段 前体序列 设计原则 耐药性 构建 酶切 制备 引入 成熟 转化 交换 | ||
1.一种过表达miR-125a-5p慢性病毒载体的构建方法，其特征在于：依据GenBank中has-miR-125a-5p序列，从miRBase中获得成熟的hsa-miR-125a和前体序列hsa-pre-miR-125a；依据has-miR-125的序列及慢病毒载体GV369，引入酶切位点AgeI/NheI，调取根据miRNA过表达载体设计原则，设计引物序列，通过PCR调取目的片段；
引物序列如下：
hsa-mir-125a(9378-2)-P1：
GAGGATCCCCGGGTACCGGTGGTCTTTCTGTCTCTGGC；
hsa-mir-125a(9378-2)-P2：
CACACATTCCACAGGCTAGTCAGTTGGTGGTCAAATG；
PCR扩增miR-125a后，经电泳鉴定，酶切，PCR产物与载体进行交换，转化；获取含有miR-125a片段的慢病毒载体GV369-miR-125a。
2.权利要求1的过表达miR-125a-5p在制备治疗肺癌药物中的应用。
3.权利要求1的过表达miR-125a-5p在制备改善厄洛替尼耐药性药物的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：其机制是miR-125a-5p通过影响Rab25/PI3K/AKT信号通路及相关凋亡蛋白表达。
5.一种用于改善厄洛替尼耐药性的药物制剂组合物，其特征在于：包括有效量的权利要求1的过表达miR-125a-5p和药学上可接受的载体或赋形剂。
6.根据权利要求1所述的用于改善厄洛替尼耐药性的药物制剂组合物，其特征在于：所述改善厄洛替尼耐药性是指改善厄洛替尼在治疗人非小细胞肺癌的耐药性。
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