[发明专利]肝素黄杆菌肝素酶Ⅰ的高效制备方法在审
| 申请号： | 201811071827.6 | 申请日： | 2018-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN109182321A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 马小来;郭进京;陈冀中 | 申请（专利权）人： | 深圳市长征生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12R1/20 |
| 代理公司： | 北京华科联合专利事务所(普通合伙) 11130 | 代理人： | 王为;孟旭 |
| 地址： | 518131 广东省深圳市龙华*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种肝素黄杆菌肝素酶Ⅰ的高效制备方法，所述方法，包括以下步骤：将肝素黄杆菌接到种子培养基中培养、再接到发酵培养基培养、离心收集沉淀、渗透胁迫得到粗酶液，对粗酶液进行一次CS(Cellufine Sulfate)柱纯化层析，即可得到高纯度的肝素黄杆菌肝素酶Ⅰ，本发明具有工艺简单、易放大，设备需求少，试剂成本低等特点，制备的肝素酶I比活达135IU/mg，纯酶活性收率高达57％，与已有方法相比，纯化收率增加将近一倍。 | ||
| 搜索关键词： | 黄杆菌 肝素 肝素酶 高效制备 粗酶液 离心收集沉淀 发酵培养基 种子培养基 活性收率 设备需求 渗透胁迫 试剂成本 肝素酶I 高纯度 柱纯化 比活 层析 纯酶 收率 制备 放大 | ||
【主权项】：
1.一种肝素黄杆菌肝素酶Ⅰ的制备方法，所述方法包括下述步骤：(1)肝素黄杆菌的发酵制备：将肝素黄杆菌从平板或斜面上接到种子培养基中培养1天，再接入二级种子培养基培养1天，然后接入发酵培养基，培养1‑2天，离心收集沉淀，为含酶的菌体细胞；(2)渗透胁迫法制备粗酶液：将含酶的菌体细胞悬浮在蔗糖溶液中0.5‑24小时，离心，取沉淀悬浮于Tris‑HCl缓冲液(含CaCl2及NaCl、pH6.5‑8.0)中，冰浴中渗透胁迫提取0.5‑5小时，离心收集清液，将沉淀再如前渗透胁迫提取一次，合并二次提取液，即为粗酶液；(3)肝素酶Ⅰ的CS柱纯化：步骤(2)得到的粗酶液上一根用Tris‑HCl缓冲液平衡过的CS柱，以同样缓冲液平衡冲洗，再以梯度浓度线性上升的缓冲液中含氯化钠线形梯度0‑0.5M洗脱3‑6个柱体积，收集有酶活性的含0.35‑0.5M氯化钠缓冲液洗脱各管，合并，以截留分子量10kd的超滤离心管浓缩，得到纯化的肝素酶Ⅰ。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳市长征生物科技有限公司，未经深圳市长征生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811071827.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
